摘要：据GenBank及相关文献提供的序列设计引物,从油菜基因组DNA中扩增出Bnpgip2-1基因完整开放阅读框。该基因全长1 068bp,与已发表的Bnpgip2基因序列(登录号:AF529694)有98%的相似性。RT-PCR分析表明,该基因(已申请序列号为KJ820998)具一个72bp的内含子(544-615),编码区为996bp,含4个限制性内切酶酶切位点(AvaⅠ,185;HindⅢ,536;EcoRⅠ,929;Apa LⅠ,972)。原核表达该基因,表达产物能显著抑制油菜菌核病菌多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性,抑制率达52.96%。生物信息学分析表明,表达产物Bn PGIP2-1有331个氨基酸,理论分子量为36.99k Da,p I为8.35,具强疏水性,主要存在于细胞壁。信号肽切点位于第22和23位氨基酸之间(SFS-KNL),N端和C端各存在5个和3个半胱氨酸残基,可形成3个二硫键;二级结构以α-螺旋(31.12%)、β折叠(16.01%)和无规则线圈(52.87%)为结构元件,具典型的LRR结构;三级结构为10个LRR按右手螺旋规则形成的一个开放裂隙区,可能负责其与病菌PG的互作。该基因的表达受病原菌侵染的强烈诱导,但对水杨酸(SA)处理不敏感,茉莉酸(JA)处理反而使其下调表达。

摘要：【目的】为克隆、表达水稻纹枯病菌Rspg1基因,明确其编码产物的生物学特性,为研究该基因在病菌致病过程及与寄主互作中的作用提供理论依据。【方法】据GenBank提供的相关序列设计特异引物扩增目的基因,并对之进行原核表达和生物信息学分析。【结果】从水稻纹枯病菌基因组DNA中扩增出一1395 bp的目的片段。RT-PCR分析表明,该片段为Rspg1基因的完整开放阅读框,含有5个内含子(278-334,57 bp;545-601,57 bp;657-715,59 bp;1090-1155,66 bp;1244-1304,61 bp),编码区为1 095 bp,编码一含有364个氨基酸的蛋白。原核表达Rspg1基因,表达产物大小约为40 kDa,具明显的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PG)活性,活性值为277.78 U/mg。生物信息学分析表明,RsPG1中含有所有生物PG特有的严格保计序列180NTD、202DD、223GHG和255RIK,存在一18个氨基酸的信号肽分子;二级结构以α-螺旋、β-折叠和随机卷曲为其基本结构单元,6个半胱氨酸残基形成3个二硫键,跨膜结构预测以从胞内向胞外分泌为主;三级结构为10个重复的β-折叠环按右手螺旋规则排列形成的螺旋结构,形成一个开放的有活性的裂隙结构。【结论】Rspg1基因编码产物为一40 kDa蛋白,具明显的PG(Polygalacturonase,PG)活性,以胞外分泌为主,且有一个开放的有活性的裂隙结构。

摘要：通过室内紫外线和药剂诱导,获得多株高抗腐霉利油菜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)突变体。与野生亲本菌株相比,抗性突变株(EC50>800μg/mL)在高糖(>40g/L蔗糖)和高盐(>5g/LNaCl)培养基上生长缓慢,表明对高渗透压比较敏感;菌丝相对电导率较高,显示细胞膜透性增大,胞内电解质渗出较多。试验还发现,在含药培养液中,亲本菌株菌丝内甘油大量合成和积累,增加462.45%,而抗药突变株甘油含量仅稍有增加或有所下降,说明抗腐霉利突变株对外界渗透压的调节能力较低。根据已报道组氨酸激酶(HK)基因序列设计特异引物,经PCR扩增和测序,获得油菜菌核病菌HK基因保守区域序列1605bp。抗、感腐霉利菌株HK基因保守区域在第45位、第81位和第625位碱基不同,但编码的氨基酸一致。因此,油菜菌核病菌对腐霉利的抗性及抗药菌株的高渗敏感性与HK基因保守区域碱基突变无关。

摘要：根据已知的不同抗病基因保守区域设计引物,通过在水稻基因组DNA中扩增和分离有相似序列的DNA片段,可以快速鉴定出候选抗病基因。选择3对扩增条带多样性较高的引物XLRRfor/XLRRrev、S1/AS3和Ptokin1/Ptokin2,对江苏27个水稻品种进行抗病基因同源序列PCR分析(resistance gene analog-PCR,RGA-PCR)。结果显示,3对引物共扩增出清晰可辨的谱带127条,其中多态性带101条,占总数的79.53%。根据聚类分析,3对引物对或引物组合扩增的RGA图谱可将品种分为多种类型,这些RGA图谱类型与稻瘟病菌7个生理小种接种鉴定的抗病表型没有完全的对应关系。