摘要：目的构建针对LRIG1LRIG1(leucine-rich repeats andi mmunoglobulin-like domains1,LRIG1)基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响,为探讨LRIG1基因沉默对人脑胶质瘤细胞的生物学行为调控奠定基础。方法根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1、LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negativesh RNA。合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列。用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15的筛选浓度。将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株。Western印迹法在蛋白水平上检测LRIG1的表达。结果重组pGenesil2-LRIG1-sh RNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明序列插入正确。G418对GL15细胞的筛选浓度为600mg/L,筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil2-LRIG1-sh RNA1组细胞LRIG1蛋白表达明显低于转染pGenesil2-negativesh RNA组。结论成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体(pGenesil2-LRIG1-sh RNA1),转染细胞后可抑制LRIG1基因表达,为下一步研究其功能奠定基础。

摘要：目的构建针对富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,建立稳定转染的细胞株,观察其对目的基因表达的影响。方法根据GenBank中LRIG2基因序列设计2条RNA干扰序列,命名LRIG2-shRNA1、LRIG2-shRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照。据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil2载体,转化扩增后进行序列测定。用不同浓度的G418作用于GL15细胞,得到G418对于GL15细胞的筛选浓度。3种重组表达载体转染胶质瘤细胞系GL15细胞,用G418筛选后挑单克隆后扩增获得稳定株。逆转录RT-PCR和Western印迹法分别在mRNA和蛋白水平上检测LRIG2的表达。结果3种重组表达载体(pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-LRIG2-shRNA2和pGenesil 2-negative shRNA)经限制性酶切及DNA测序分析证明序列插入正确。G418对于GL15细胞的筛选浓度为600μg/ml,筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil2-LRIG2-shRNA2组细胞LRIG2 mRNA和蛋白表达明显低于转染pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-negative shRNA组。结论成功构建了针对LRIG2基因的shRNA表达载体(pGenesil2-LRIG2-shRNA2),转染细胞后可抑制LRIG2基因表达,为研究LRIG2基因的功能提供了基础。

摘要：目的探讨RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3（LRIG3）基因表达后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制。方法设计两对含LRIG3特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒及含非特异性shRNA的对照质粒，转染胶质瘤细胞系GL15、G418筛选出稳定株，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法检测LRIG3表达的改变，流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期变化，AnnexinV—FITC／PI双标记分析细胞凋亡。结果实验组细胞LRIG3mRNA和蛋白水平与对照组比较分别下降了52．4％、63．8％和50．9％、67．4％。流式细胞仪分析显示，实验组的G2／M期细胞细胞百分率比对照组明显增加，细胞增殖指数显著增加（P〈0．01）；LRIG3基因表达下调后还具有显著的抗凋亡作用（P〈0．05）。结论LRIG3特异性siRNA可明显抑制LRIG3基因的转录和表达，从而促进GL15细胞的增殖和使细胞周期阻滞在G2／M期并能抑制其凋亡。

摘要：基层农业干部泛指在基层农业系统从事与农业相关的管理工作或直接从事农业生产技术工作的国家干部。近年来,党和政府不断加大对农业干部的培训工作力度,但培训效果差异较大。以南京农业大学继续教育学院2014年以来所承担的苏中地区农业干部培训项目为基础,利用SPSS统计分析,采用多维度–多归因量表(MMCS)设计调查问卷,获取相关数据,通过归因方式对农业干部培训效果及其影响因素进行分析研究,提出改善的建议,为今后设计和开展类似培训项目提供指导。

摘要：目的探讨Xper-CT与3D-DSA图像融合技术在合并血肿的小型脑动静脉畸形（AVM）显微手术中的作用。方法回顾性分析2010年4月至2012年6月采用该技术指导显微手术的32例脑AVM破裂出血患者。术前DSA检查同时采集Xper-CT图像与三维图像，在后处理工作站进行图像融合。充分掌握术前信息后，全麻下行血肿清除加一期血管畸形切除术。结果患者均顺利完成图像融合。根据融合图像，可显示血肿与供血动脉、畸形血管团及引流静脉的相对位置，判断出血的可能部位；设计手术骨窗的位置及范围，指导手术。术后DSA复查，畸形血管团均完全切除。结论Xper-CT图像与3D-DSA图像融合技术在术前能从定位病变、规划手术入路等方面为破裂脑AVM显微手术提供重要信息，有助于手术顺利进行。

摘要：目的构建LRIG3(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 3,LRIG3)基因特异的RNA干扰质粒,为探讨抑制LRIG3基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行为调控的研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的LRIG3基因核苷酸序列,选择设计2条能转录短发卡RNA(shRNA)的DNA序列,命名为LRIG3-shRNA1、LRIG3-shRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为negative-shRNA。并与pGenesil2质粒载体连接,转化感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒,使用限制性内切酶SalI酶切电泳,DNA测序鉴定。3种重组表达载体转染胶质瘤细胞系GL15细胞,用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株。逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测LRIG3的表达。结果重组质粒成功转化感受态大肠杆菌,经SalI酶切琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明寡核苷酸成功插入到预计位点,经测序鉴定,序列完全正确。G418筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil2-LRIG3-shRNA组细胞LRIG3mRNA和蛋白表达明显低于转染pGenesil2-negative-shRNA组。结论成功构建针对LRIG3基因的特异性shRNA真核表达载体,转染细胞后可抑制LRIG3基因表达,为进一步研究其基因功能奠定了基础。