摘要：目的　利用核酶技术切割肿瘤多药耐药基因 (MDR1) ,逆转肿瘤抗药性。方法　按照“锤头结构”模型设计、合成了核酶 196MDR1(196RZ) ,并定向克隆入包含RNA多聚酶III启动子的逆转录病毒载体中。通过脂质体介导 ,将抗mdr1核酶表达质粒 (N2A +tRNAimet iMDR1 Rz)导入人肝癌耐药细胞株HepG2。分别采用RT PCR、荧光PCR、蛋白质印迹分析 (westernblot)、流式细胞仪检测术、罗丹明聚集及MTT方法 ,观察细胞的RZ、mdr1mRNA、P糖蛋白 (Pgp)表达和对化疗药物敏感性的变化。结果　经抗MDR1核酶处理的耐药HepG2细胞 ,RZ稳定表达 ,MDR1mRNA、Pgp明显降低 ,细胞内罗丹明聚集 ,对阿霉素的敏感性提高 2 0 0倍。结论　针对多药耐药基因mdr1的核酶可明显降解mdr1mRNA ,抑制Pgp的表达 ,具有强大的逆转肝癌耐药细胞HepG2多药耐药的作用。

摘要：传统陶瓷艺术在当前发展中存在一定的阻力,这主要是因为人们思想在逐渐转变。当下创新是社会关注的话题,因此在这种创新思想和实践的结合下,对于德化陶瓷而言,如何在坚持传统技术的基础上,结合创新,创作出优秀的陶瓷艺术品,是值得陶瓷匠人思考的问题。结合德化陶瓷的发展和传承现状进行全面详细分析,为德化陶瓷的进一步发展提出了一些建议。

摘要：目的　从耐药肿瘤组织中进行mdr1cDNA的全长克隆和pc MDR1重组质粒的构建。并转染HepG2细胞 ,快速诱导其耐药 ,并筛选其抗性克隆。 方法　设计单酶切位点引物 ,利用长距离逆转录 聚合酶链反应 (LongRT PCR )技术 ,从HepG2耐药细胞扩增mdr1cDNA ,约 3 .8kb大小。将其插入至真核表达载体 pcDNA3 .0质粒中构建 pc MDR1诱导质粒 ,使其能够在真核细胞中表达P 糖蛋白 (P gp)。转染HepG2细胞 ,并用G418筛选出转染的细胞。结果　成功地扩增出3 .8kb左右的mdr1cDNA片段 ,经酶切鉴定、RT PCR扩增特异片段和序列测序结果显示质粒构建初步成功 ,用G418筛选细胞耐药抗性克隆的时间约为 14d。结论　从耐药肿瘤组织中进行mdr1cDNA全克隆和pc MDR1诱导质粒构建的成功为快速诱导细胞耐药和进一步研究肿瘤细胞的耐药机制奠定了基础。

摘要：目的探讨反基因技术封闭缺氧诱导因子(HIF-1α)作用位点对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的抑制作用及对细胞生长的影响。方法针对VEGF启动子区HIF-1α作用位点设计反义脱氧寡核苷酸(ODN),并以不同浓度分别转染肝癌细胞。用免疫组化SABC法、Western blot和RT-PCR技术检测肝癌细胞中VEGF mRNA和蛋白表达;同时用经转染后的肝癌细胞培养上清液刺激常规培养的人脐静脉内皮细胞和肝癌细胞,用MTT法观察细胞生长情况。结果免疫组化结果显示不同浓度正、反义ODN与肝癌细胞共同孵育48h后,VEGF蛋白的表达在正义ODN组与空白对照组间差异无显著性意义(P>0.05);反义ODN各浓度组与空白组比较差异均有显著性意义(P<0.05),在浓度为10μmol/L时差异有极显著性意义(P<0.01)。Western blot和RT-PCR结果显示在浓度为10μmol/L作用48h时,正义ODN组积分灰度值和RNA相对比值分别为59743.2±10412.5和0.783±0.032,反义ODN组分别为38694.5±10925.1和0.468±0.015,两组间差异有极显著性意义(P<0.01)。反义ODN对肝癌细胞生长抑制效应呈浓度依赖性。结论针对VEGF的反基因技术能够抑制肝癌细胞的VEGF表达并抑制细胞生长,有望成为抗肝癌的新一代基因治疗手段。

摘要：目的探讨细胞间黏附分子-1（ICAM-1，CD54）基因的短发夹结构RNA（shRNA）表达载体pGenesil-1／CD54对SMMC-7721肝癌细胞株CD54表达的抑制作用。方法设计CD54基因shRNA片段和阴性对照shRNA片段，构建pGenesil-1／CD54和阴性对照表达载体，载体在eoli菌扩增、鉴定后，转入SMMC-7721细胞。应用免疫组织化学技术检测肝癌细胞中CD54基因的表达。结果阳性和阴性表达载体酶切，电泳有65bp和4．9kb条带，载体插入片段测序，与设计序列相同，表达载体构建正确。免疫组织化学检测表明，阴性对照表达载体转染SMMC-7721细胞，细胞膜和细胞质着黄色和棕色，pGenesil-1／CD54转染SMMC-7721细胞，不着色或着淡黄色。结论CD54的shRNA能特异性地抑制CD54在肝癌细胞SMMC-7721中的表达。

摘要：本文首先详尽分析了东西方大众体育产生的社会背景,然后,从东西方各国高度重视大众体育发展,建立组织领导机构;制定科学可行的全民健身发展规划;制定有关《体育法》和规章制度;设计丰富多彩的活动;加强舆论宣传,扩大大众体育影响;重视场馆设施的建设和现有场地的利用等六个方面详细论述了东西方国家在发展大众体育方面的共同特点,最后,概括归纳出东西方大众体育今后发展的共同趋势是:大众体育的进一步社会化(家庭化)、娱乐化、终身化和科学化。

摘要：加里福尼亚海洋渔业调查合作组织设计的鱼卵垂直拖网(称CalVET；图1)，用来采集表层到70米深的浮游鱼卵。网口内径0．03m，网滤过表面积0．87m^2，网目0．333mm，放网速度70米／分，网可停某深度10秒，收网速度70米／分。

摘要：计算机网络技术在高校体育教学中的应用,是体育教育现代化的一个重要标志。利用网络进行体育教学的实践,促进了教育改革,冲击了传统的教育观念,使教学模式发生了很大的改变,故此,提出对网络环境下高校体育教学的思考。

摘要：本文对企业CAE软件集中管理问题进行了探讨,阐述了企业CAE集中管理的模式,并介绍了CAE软件管控平台在本单位的实际建设和应用情况。通过管理和平台建设,本企业在CAE软件集中管理方面取得了良好的效果。^([1])