摘要：中图分类号R373摘要目的:建立采用荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测人微小病毒B19的方法。方法:根据B19病毒VP2基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的B19病毒VP2区基因片段克隆入pGEMT载体,重组质粒pGEM-T-VP2经筛选、鉴定后,作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测;对15例B19病毒感染血标本和几种其他病毒进行PCR测定。结果:应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系;与定量对照曲线比较计算,15例B19病毒感染标本中B19拷贝数为4.8×105μl-1～8.7×108μl-1;对其他几种病毒的扩增均无信号出现。结论:成功建立了检测B19的荧光定量PCR方法,较常规PCR技术更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。

摘要：背景:研究人骨髓间充质干细胞定向分化为多巴胺神经元及分化后细胞的功能特征,对细胞移植治疗包括帕金森病在内的神经精神性疾病具有重要临床意义。目的:采用脑源性神经营养因子、forskolin及多巴胺联合诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元定向分化,观察诱导产生的多巴胺神经元的结构和功能。设计:随机对照观察。单位:郑州大学及河南大学。材料:实验于2005-03/2006-09在郑州大学和河南大学实验室完成。实验用骨髓取自15名健康志愿者。脑源性神经营养因子、多巴胺、forskolin及单克隆抗体酪氨酸羟化酶为美国Sigma公司产品。方法:①通过密度梯度离心获取人骨髓中的单个核细胞,贴壁培养纯化骨髓间充质干细胞。采用50μmol/L脑源性神经营养因子,10μmol/Lforskolin和10μmol/L多巴胺联合对骨髓间充质干细胞进行诱导。②诱导2周后应用电子显微镜观察细胞超微结构;免疫细胞化学染色检测神经元烯醇化酶(NSE)和酪氨酸羟化酶(TH)的表达;采用RT-PCR检测多巴胺神经元分化过程中转录因子Nurr1,Ptx3,Lmx1b及酪氨酸羟化酶mRNA表达;同时以未诱导的细胞为对照,应用高效液相色谱检测细胞多巴胺的释放水平。主要观察指标:①细胞超微结构。②NSE和TH的表达变化。③细胞内关键转录因子及酪氨酸羟化酶mRNA变化。④细胞释放多巴胺情况。结果:①细胞超微结构:诱导2周后细胞胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体以及神经微丝的形成。②NSE和TH表达的变化:免疫细胞化学染色结果表明诱导分化后NSE和TH阳性细胞的表达随诱导时间的延长逐渐增高(P<0.001)。③细胞内酪氨酸羟化酶及关键转录因子变化:RT-PCR结果显示细胞均可表达Nurr1,Ptx3,Lmx1b和酪氨酸羟化酶的mRNA。④细胞释放多巴胺情况:诱导2周后的细胞多巴胺释放水平高于未经诱导的细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脑源性神经营养因子、forskolin及多巴胺可在体外诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化,并具有多巴胺神经元的结构和功能特征。

摘要：目的:构建人血管内皮生长因子(VEGF)mRNA靶向siRNA表达载体,观察其表达情况。方法:设计人VEGF靶向的发夹样siRNA,依据设计,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneo-GFP载体,转化扩增后得到重组载体pSUPERneo-GFP-siVEGF,进行序列测定。用脂质体转染法将重组载体转染食管癌细胞株Eca109,采用RT-PCR检测转染细胞VEGF mRNA的表达水平。结果:经过酶切鉴定与测序,pSUPERneo-GFP-siVEGF构建成功。稳定转染该重组体的Eca109细胞VEGF mRNA表达水平明显降低。结论:成功构建了针对VEGF mRNA的siRNA载体,转染细胞后可显著抑制VEGF mRNA的表达。

摘要：目的:通过对我校2011、2012、2013级本科涉外护理专业学生进行调查,了解本科护生对基础医学课程的评价与建议,分析存在的问题,为下一步更好地完善基础医学课程设置提供参考。方法:参考相关文献,自行设计调查问卷,对我校320名本科涉外护理专业学生进行调查,并对其中部分学生代表进行了访谈。结果:本科涉外护生对课程设置的满意度为86%;78.2%的学生认为学时数较合理,但应合理分配理论与实验的比例;95%以上的学生认为最重要的三门课是人体形态学、护用药理学、病理学;100%的学生认为课程衔接合理;学生普遍喜欢在实验室学习,认为老师在教学中应加强基础医学知识与护理的紧密联系,教材选择应突出护理特色,双语课程难度太大,在教材选择、教学方法上应注意改进。结论:本科涉外型护生对基础医学课程的设置总体情况较满意,但认为在理论实验学时数、教学方法、课程内容、教材选择等方面需要进一步完善,建议教育者进一步合理配置护理专业基础医学课程,完善基础医学教学,提高基础医学课程教学质量。

摘要：医学机能学实验教学在医学院校培养高级人材方面具有非常重要的作用。文章介绍自2002以来年在医学机能学实验教学方面的一些改革,其中包括实验室体制与管理模式的改革及课程体系与教学内容方法的改革,形成了跨学科综合性实验课程体系,获到了单科教学难以达到的效果。自行设计实验的开设极大地挖掘学生的学习潜力,提高学生学习欲望,激发学生的科研能力和创新意识,全方位多层次地锻炼学生的综合能力。

摘要：本文采用正交设计,初步探讨了厌氧棒菌苗(CP)诱导内源性肿瘤坏死因子(TNF)活性的条件。结果表明:仅用CP一种调节剂,按照一定方式对小鼠进行三次刺激.便可使其血清具有显著的内源性TNF活性。有TNF活性的部分经SDS—PAGE和凝胶过滤测得分子量分别约为60,000dal和55,000dal;醋酸纤维膜电泳显示为α球蛋白;TNF活性经56℃处理30分钟仍稳定,70℃,10分钟即丧失;在pH6～9之间、活性稳定。

摘要：目的： 有效去除霍乱毒素Ａ 亚基（ ＣＴＡ） 的毒性作用而保存其佐剂性能。方法： 采用ＰＣＲ 体外定点突变技术（ＰＣＲＳＤＭ） ，设计两对引物，引入一个突变位点，通过重叠延伸法两次ＰＣＲ 扩增，使ＣＴＡ 编码基因第６３ 位密码子由ＣＴＣ 突变为ＴＴＴ，亦将扩增片断克隆入ＰＵＣ１９ 载体。结果： ＤＮＡ 测序结果表明在预期位点已发生突变，用ＰＣＲ 诱导成功ＣＴＡ 突变体。结论： ＰＣＲ 诱导突变准确、简便，为深入研究ＣＴ