摘要：目的探讨双重荧光实时聚合酶链反应(real-time PCR)在肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)对大环内酯类抗生素耐药基因检测中的应用。方法19例自临床咽拭子样品分离培养的肺炎支原体及标准菌株,FH,进行体外药物敏感试验,并用自行设计的双重荧光Real-time PCR检测大环内酯类抗生素耐药基因型,同时对相应序列测序分析。抽提127份经PCR测定MP阳性的临床样品基因组DNA,用MP阴性的基因组DNA抽提物5份做阴性对照,用Real-time PCR检测大环内酯类抗生素耐药基因型。结果19例分离培养的MP,体外药物敏感试验结果显示15株有耐药,并且都有23S核糖体RNA(rRNA)V区基因A2063G位点突变;而4株对大环内酯类抗生素敏感的MP基因型为23S rRNA V区基因2063A;测序结果证实Real-time PCR结果。127份MP阳性的基因组DNA抽提物,5份用MP阴性的基因组DNA抽提物,经Real-time PCR检测,其中122份样品为MP 23S rRNA V区基因A2063G位点突变,2份样品的2063位点碱基为A,还有3份样品的2063位点碱基既有A又有G。127份MP阳性的样品在Real-timePCR检测中未见到2条荧光曲线都不生长的情况。5份阴性对照2条荧光曲线都不生长。结论双重荧光Real-timePCR能为临床快速、准确检测MP对大环内酯类抗生素耐药的基因型。

摘要：含有劲性结构的超高层建筑的施工,材料吊装任务繁重,如何选择一款有效的大型垂直运输机械和合理的布置方案显得尤为关键。连云港帝豪·阳光国际工程为劲性结构的超高层建筑,今通过对工程结构、塔吊布设、选型等方面的分析,最终布置了一台动臂式内爬塔吊,结果促进了工程的顺利实施,并圆满地完成施工任务。

摘要：目的建立以悬浮芯片为技术基础的临床常见葡萄球菌的快速检测方法。方法以细菌16S rRNA基因保守区序列设计1对通用引物，分别采用对称PCR和不对称PCR扩增5种葡萄球菌，经测序确定后，采用悬浮芯片系统对不同的PCR产物进行检测。结果2种PCR均扩增出5种葡萄球菌目的片段（780-820bp），不对称PCR得到了大量单链产物，其产物在悬浮芯片系统的检测信号高于对称PCR，悬浮芯片系统对5种葡萄球菌的鉴定率为100％。结论16SrRNA可以作为细菌快速鉴定的靶序列，不对称PCR产物可以显著提高与悬浮芯片杂交检测的灵敏度，悬浮芯片系统在鉴定细菌方面具有简单快速、高通量、高检出率等特点，可以作为细菌快速鉴定的一种新方法进行深入开发利用。

摘要：目的建立以多功能悬浮点阵技术为基础的临床常见肠道致病菌的快速检测方法。方法以细菌16S rDNA基因保守区序列设计1对通用引物,采用不对称PCR扩增7种临床常见肠道致病菌标准菌株,多功能悬浮点阵技术对不同菌株的PCR产物进行检测以验证相应菌种探针的特异性,最后对48份粪便标本进行肠道致病菌高通量快速检测。结果 7种临床常见肠道致病标准菌株的不对称PCR得到了大量单链产物,其产物用多功能悬浮点阵技术的检测特异性为100%,48份粪便标本不对称PCR产物可与相应探针发生特异性结合,且在多功能悬浮点阵技术的相应检测信号大于阴性对照3倍以上,5种细菌的多功能悬浮点阵技术检测结果与培养鉴定结果符合率100%,48份标本PCR产物均与志贺菌属探针发生杂交反应(阳性率100%)。结论 16S rDNA可以作为细菌快速鉴定的靶序列,不对称PCR产物可以显著提高与悬浮芯片杂交检测的灵敏度,多功能悬浮点阵技术在鉴定细菌方面具有简单快速、高通量、高检出率等特点,可以作为细菌快速鉴定的一种新方法,但无法鉴别志贺菌属和大肠埃希菌属。

摘要：目的建立一种基于尼龙膜的反向斑点杂交法,用于检测乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子区(BCP)A1762T/G1764A突变。方法根据我国HBV主要流行的基因型为B和C,从GenBank上查出4种HBV BCP序列。利用在线工具Clustal W进行比对,针对该突变位点设计引物和检测探针。探针经合成和修饰后点在带正电的尼龙膜上。将反向斑点杂交法结合地高辛检测试剂盒用于检测A1762T/G1764A突变,以测序法确定该区域序列的标本为检测对象。结果反向斑点杂交法分别检测5例A1762/G1764病毒株、2例T1762/G1764病毒株、5例A1762/A1764病毒株和4例T1762/A1764病毒株,结果与测序完全相同。结论应用本方法可以快速、准确地HBV相关的热点突变。

摘要：目的探讨鸡葡萄球菌的生物学特性、可能存在的毒力因子及快速检测方法。方法首先观察鸡葡萄球菌的培养特性，镜下观察菌体结构。采用自动微生物分析仪（VITEK60、VITEK-Ⅱ）和分子生物学方法（细菌的通用引物16S rRNA进行PCR扩增）进行鉴定。以金黄色葡萄球菌的5种毒力因子基因序列设计引物，采用PCR方法扩增鸡葡萄球菌相应的毒力因子，同时采用悬浮芯片技术对该菌进行快速检测。结果鸡葡萄球菌的初始菌落形态与金黄色葡萄球菌类似，48h后菌落变粗糙，颜色加深；在VITEK60上细菌不能鉴定，在VITEK—Ⅱ上鉴定为鸡葡萄球菌并且该菌的16S rRNA的PCR产物序列与标准序列同源性达99％；鸡葡萄球菌的毒力因子均为阴性，悬浮芯片技术可以在4—6h内检测出鸡葡萄球菌。结论VITEK-Ⅱ可以鉴定鸡葡萄球菌等罕见细菌，分子生物学方法可以对该菌进行快速准确鉴定；鸡葡萄球菌的致病性和毒力有限；鸡葡萄球菌可能引起新的人畜共患病，应引起足够重视。

摘要：[目的 ]应用寡核苷酸芯片研究胃癌差异表达基因。 [方法 ]根据文献获取基因 ,查阅相应基因序列设计并合成探针 ,将探针点样于化学修饰过的载玻片上 ,制成寡核苷酸芯片。抽提胃癌与相应正常组织总RNA ,并以其进行逆转录掺入双色荧光合成荧光标记的cDNA探针 ,混合后与芯片杂交 ,经严格洗片后扫描获取图象 ,计算机分析比较胃癌组织与正常组织的差异表达基因。 [结果 ]在 2 88条基因中胃癌组织与正常胃粘膜组织存在差异表达的基因 ,检测 10例标本共有 11条基因表达存在明显差异 ,其中表达明显增高的有 7条 ,表达明显降低的有 4条。 [结论 ]胃癌组织与正常胃粘膜组织存在大量差异表达的基因 ,胃癌的发生发展与这些基因密切相关 ;寡核苷酸芯片在胃癌相关基因的研究具有重要意义。