摘要：目的构建EB病毒vIL-10基因的原核表达载体并纯化vIL-10,进行小鼠实验探究其对MC38肿瘤细胞的作用,为进一步探究vIL-10的在机体内的作用及其机制奠定基础。方法根据vIL-10的DNA序列,设计引物并通过PCR扩增获得vIL-10基因;构建重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1,将重组质粒转化***5α;抗性平板筛选阳性菌落,提取质粒后做PCR、双酶切及测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1转化***3并用氨苄西林筛选、IPTG诱导表达,超声波破碎菌体提取蛋白并做SDS-PAGE、Western blot鉴定;大量培养阳性菌株,破碎菌体后提取蛋白,利用GST标签纯化vIL-10,取少量纯化产物再次做SDS-PAGE、Western blot鉴定;凝血酶切掉GST标签,透析袋除盐、浓缩蛋白后测定蛋白含量,备用;收集MC38细胞,皮下注射6周龄体重相近的野生型、IL-10基因敲除型C57BL/6J小鼠,3周后取成功构建的肿瘤模型小鼠,按400μg/kg肿瘤周围浸润注射vIL-10,每7天注射1次,共注射2次。末次注射7d后处死小鼠,剥离肿瘤称重并记录、分析。结果PCR获得的vIL-10基因大小约为513bp,重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1的PCR、双酶切结果均符合预期,基因测序结果与vIL-10模板序列相符;转化vIL-10-pGEX-4T-1的***3经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳显示与对照组对比可见45ku条带,Western blot显示该蛋白表达成功;阳性菌株经大量培养,提取蛋白后用GST标签进行纯化,Western blot结果显示该蛋白能被特异性纯化,经切割透析浓缩后测定蛋白含量为0.56mg/mL;动物实验结果显示,野生型(C57BL/6J)小鼠注射vIL-10蛋白组比未注射组肿瘤重量明显增加(P<0.05);IL-10基因敲除(IL-10-KO)小鼠注射vIL-10组比未注射组肿瘤重量明显增加(P<0.001)。结论经Western blot鉴定含有重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1的***3能成功表达vIL-10,动物实验表明vIL-10能够促进肿瘤生长。为探究vIL-10对肿瘤的作用研究及其机制奠定了基础。

摘要：“双创”能力即创业能力与创新能力。从社会发展角度来看,创新旨在以新思考、新创意造福社会,提升国民幸福指数;创业则能带动社会经济的发展,为国家富强提供有力支持。具备“双创”能力的中职生能够更快速地适应职场生活,发挥更大价值,推动社会经济的发展。因此,在中职英语教学中大力培养学生的“双创”能力,具有重要的现实意义。教师须重视学生综合能力的培养,在教学中同步推进语言教学与“双创”教学,培养兼具创新思维与创业能力的高素质英语人才。

摘要：义务教育语文课程标准（2011版）明确指出：语文课程评价具有检查、诊断、反馈、激励、甄别和选拔等多种功能，其目的是为了考察学生实现课程目标的程度，检验和改进学生的学习与教师的教学，改善课程设计，完善教学过程。应发挥语文课程评价的多种功能，尤其应注意发挥其诊断、反馈和激励的功能，有效地促进学生的发展。在目前的学校教育中，考试仍然是语文课程评价的主要手段。不同类型的考试又分别实现形成性评价和终结性评价两种功能。如果说升学考试是一种终结性评价的话，那么初中三年内出现的调研测试、期中考试、期末考试等就应属于形成性评价。在“减负”背景和“五严”规定下，这些形成性评价更应引起教师的高度重视。对教师而言，这些评价可以及时了解学生的学习情况和获得教学效果的反馈信息，据此分析自己教学的优劣，查漏补缺，