摘要：为建立梨轮纹病原菌和炭疽病病原菌的分子检测方法,根据GenBank上炭疽病原菌和轮纹病原菌不同种的ITS序列差异设计2对引物TJ1/TJ2和LW1/LW2,对2种病原菌菌株进行扩增,比较了常规PCR和巢式PCR的检测灵敏度,并对果园中接种梨轮纹病原菌的梨果实进行检测。结果表明,建立的PCR体系可分别从炭疽病原菌和轮纹病原菌菌株扩增出317 bp和325 bp的特异性条带,对其他相似或相近的病原真菌则无扩增条带。巢式PCR技术的灵敏度比常规PCR提高了约105倍,且可以在接种较低浓度(1 ml 10个)轮纹病原菌孢子液7 d后的梨果实组织中检测到病原菌。说明使用巢式PCR技术,可以准确、灵敏地监测梨轮纹病原菌在果园的种群消长动态。

摘要：根据绿色荧光蛋白基因和枯草芽孢杆菌木糖诱导型启动子PxylR序列 ,分别设计两对特异引物primersPxyF R和primersgfpF R ,扩增获得了完整的启动子PxylR和gfp基因序列。进一步以上述产物混合物为模板 ,以primerPxyF primergfpR做引物进行重迭PCR ,获得了PxylR gfp重组翻译融合表达盒。经SphⅠ和KpnⅠ完全酶切后 ,将PxylR gfp表达盒分别插入大肠杆菌_苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315和大肠杆菌 枯草芽孢杆菌穿梭载体pRP2 2。相应的重组表达质粒pGFP315和pGFP2 2转化枯草芽孢杆菌感受态细胞。前者在标准菌株 16 8中得到良好发光表型 ,后者则在标准菌株 16 8和野生目标菌株B916中均得到良好的发光表型。室内平板抑菌实验结果显示B916生防效果与出发菌株没有明显差异 ,遗传稳定性研究表明连续稀释培养约 175代后 ,工程菌株稳定性为 94 % ,质粒丢失频率低于 3 5× 10 - 4 代。

摘要：以91个番茄晚疫病菌菌株为材料,利用醋酸纤维素薄膜电泳技术,对其6-磷酸葡萄糖异构酶(Gpi)和肽酶(Pep)进行基因型鉴定与分析。结果共发现4种Gpi类型:100/100/111、86/100/111、86/100和100/100;两种Pep类型:100/100和92/100。其中100/100/111和100/100分别为病样采集区主流的Gpi与Pep类型,在所有病样采集区均有发现,各占全部鉴定菌株数量的85.7%和94.5%。醋酸纤维素薄膜电泳技术可以快速、准确应用于晚疫病菌同工酶基因型鉴定。

摘要：生防菌PTS-394是前期筛选获得的一株对番茄青枯病有较好田间防效的枯草芽孢杆菌。通过Plackett-Burman试验设计及Box-Behnken设计的响应曲面法(RSM)对影响该菌发酵的培养基及培养条件进行优化,以提高PTS-394发酵量,增强其生防效果。结果表明:获得了PTS-394发酵达最大孢菌含量和抑菌活性时培养基关键因子的最优配比,此时菌含量和抑菌带宽的预测值分别为4.43×109 cfu·mL-1和6.20mm,与初始培养基相比,分别提高104.7%和44.8%,以优化的培养基为基础,得到了最优培养条件,此时发酵活菌数和抑菌带宽的最大预测值为6.32×109 cfu·mL-1和8.24mm,与初始发酵条件下相比分别提高39.2%和46.0%;且结果均得到了1L摇瓶发酵实测验证。结果证明所建模型对PTS-394发酵工艺的模拟是有效的,说明生防菌PTS-394发酵工艺可应用响应曲面法进行有效的优化。

摘要：为明确枯草芽孢杆菌生防菌株Bs-916的抑菌蛋白质Bacisubin的编码基因,并初步解析Bacisubin的抑菌机理,根据该蛋白质的部分序列设计简并引物,获得了编码基因的部分序列,参考基因组数据库克隆了Bacisubin基因全序列。将Bacisubin基因克隆至PET28a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中表达获得His标签融合蛋白质,并利用次甲基蓝-重铬酸钾法初步检测了该融合蛋白质的酶催化活性。克隆获得Bacisubin基因开放阅读框序列共1 161 bp,G+C含量为51.3%,可编码386个氨基酸,编码蛋白质与Bs-168菌株的草酸脱羧酶Yvrk蛋白质的氨基酸相似度为87%,与其他多种细菌和真菌的草酸脱羧酶的N端和C端Cupin活性中心区域和Mn2+结合区域高度保守。预测Bacisubin分子量为43 600,等电点为5.18,是较稳定的可溶性草酸脱羧酶,其催化最适pH为6.0左右,最适温度为30℃左右。说明枯草芽孢杆菌Bs-916的抑菌蛋白质Bacisubin为草酸脱羧酶,抑菌作用可能与其降解草酸的能力有关。

摘要：对前期筛选获得和在田间试验中防治水稻细菌性条斑病效果较好的解淀粉芽胞杆菌Bacillusamyloliquefaciens Lx-11,通过Plackett-Burman试验设计及Box-Behnken设计的响应曲面法(response surfacemethodology,RSM)对影响生防菌株Lx-11发酵培养基和培养条件进行了优化。培养基3个主要因子的质量浓度分别为玉米淀粉11.2 g.L 1、黄豆粉14.6 g.L 1和酵母膏0.62 g.L 1。培养条件优化试验得出:培养温度、通气量和接种量是影响发酵活菌数的主要因子,由所得响应曲面方程预测出这3个主要因子分别为30.84°C、59.68 mL/250 mL和1.52%时,在初始pH为7.0,150 *** 1培养48 h的条件下,发酵活菌数和抑菌带宽的最大值分别为3.75×*** 1和8.2 mm。经摇瓶发酵试验和抑菌活性验证该理论预测值与实际值无显著差异。

摘要：稻曲菌(有性态:Villosiclava virens;无性态:Ustilaginoidea virens)有性繁殖产生的子囊孢子是水稻稻曲病可能的初侵染源之一,交配型基因座对真菌有性繁殖中的性别控制起着决定性作用。为进一步揭示稻曲菌的有性繁殖方式,本研究首次克隆了稻曲菌交配型基因mat1-1-1的α-结构域(α-domain)相应核苷酸序列,发现其与麦角菌科真菌Cordyceps militaris、***和Claviceps purpurea的mat1-1-1基因中α-结构域相应核苷酸序列同源性分别为61%、63%和68%;根据mat1-1-1和mat1-2-1部分基因序列设计特异性引物,并使用PCR方法检测了来源于3个异源子座的240个子囊孢子单孢菌株和50个田间菌株的交配型基因,结果显示稻曲菌mat1-1-1和mat1-2-1基因分别存在于不同菌株中;将具有相同或不同交配型基因的菌株配对接种,发现菌核通常产生在mat1-1-1和mat1-2-1基因型菌株配对接种产生的稻曲球上,其中大部分菌核可萌发产生子座,而菌株单独接种或具有相同交配型基因的菌株配对接种水稻后多数不能形成菌核;根据以上结果初步推断稻曲菌为异宗配合真菌。

摘要：【目的】明确解淀粉芽孢杆菌B1619对连作西瓜枯萎病的防效,并探讨其合理施用方法。【方法】在连续种植4年西瓜的土壤环境下,采用随机区组设计,研究供试微生物菌剂在不同施用方式和施用剂量下,对连作西瓜生长、枯萎病发生及根际土壤主要菌群的影响。【结果】解淀粉芽胞杆菌B1619采用穴施方式、剂量(18+9)g·穴-1时对连作西瓜的增产率达到43.20%,中心糖、边糖、商品率均显著增加。该施用方法有效改变了连作西瓜根际的菌群环境,其中细菌数量在开花期和成熟期分别是对照的1.93倍和1.27倍,病原菌尖孢镰刀菌数量分别降低为对照的33.38%和37.19%。【结论】解淀粉芽胞杆菌B1619采用穴施方式、剂量(18+9)g·穴-1对4年连作西瓜产量、品质提升,西瓜枯萎病防治效果最好。