文献检索-宁波市创意产业特色资源库

限定检索结果

利用CRISPR/Cas9系统构建SIRT1基因敲除的K562细胞株: 收藏
分享
引用; 《广东医科大学学报》2023年第5期41卷 504-508,514页; 作者：温后烺陈婧曾杰清彭流泉陈日玲马国达张海涛汪亚君广东医科大学顺德妇女儿童医院广东佛山528300 广东医科大学生化教研室广东湛江524023; 目的构建去乙酰化酶SIRT1基因敲除的K562单克隆细胞株,研究SIRT1基因对细胞增殖的影响。方法设计靶向SIRT1酶活性中的sgRNA编码序列,构建CRISPR/Cas9载体并转染K562细胞,嘌呤霉素筛选后单克隆化并扩增;采用基因组测序、PCR和免疫印迹的...; 目的构建去乙酰化酶SIRT1基因敲除的K562单克隆细胞株,研究SIRT1基因对细胞增殖的影响。方法设计靶向SIRT1酶活性中的sgRNA编码序列,构建CRISPR/Cas9载体并转染K562细胞,嘌呤霉素筛选后单克隆化并扩增;采用基因组测序、PCR和免疫印迹的方法进行基因敲除效果鉴定;对选定的SIRT1基因敲除的单克隆做生长曲线检测。结果目标质粒测序符合,质粒转染细胞后检测到基因组靶序列位置杂合峰,获得SIRT1基因敲除的单克隆3个,SIRT1基因敲除导致细胞增殖明显减缓。结论成功构建了SIRT1基因敲除的细胞株,该细胞可作为血液系统疾病研究的有力工具。; 来源：详细信息评论

限定检索结果