摘要：构建菠萝(Ananas comosus(Linn.) Merr.)质膜水通道蛋白基因(AcPIP1∶2)原核表达载体和体外转录载体,为制备AcPIP1∶2抗体和含有Poly(A)+的AcPIP1∶2转录子奠定基础.以菠萝果实为试验材料,提取总RNA并反转录成cDNA.以cDNA为模板,根据GenBank中公布的AcPIP1∶2全长cDNA序列(登录号:XM020229679.1)设计合成特异性引物进行PCR扩增,获得AcPIP1∶2开放阅读框(ORF)序列.序列分析表明,获得的AcPIP1∶2序列与GenBank中公布的序列一致,序列长度为867 bp.该序列经Hind III和Xho I双酶切后亚克隆至原核表达载体pET32a(+),酶切、测序表明,成功构建了重组载体pET32a(+)-AcPIP1∶2.将pET32a(+)-AcPIP1∶2转到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中表达,结果表明,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生分子量为50 ku的融合蛋白.该序列经Hind III和Xba I双酶切后亚克隆至载体pSP64 Poly(A)中,酶切、测序表明,成功构建了重组载体pSP64 Poly(A)-AcPIP1∶2.

摘要：本研究以菠萝(Ananas comosus (L.) Merrill)果实为材料提取总RNA并合成cDNA.根据菠萝质膜水通道蛋白基因(AcPIP2-4)序列(GenBank登录号:XM020240565.1)设计1对特异性引物,通过RT-PCR从果实cDNA中扩增AcPIP2-4的ORF序列,并将该序列亚克隆至原核表达载体pET32a(+).经酶切鉴定和序列分析,结果表明,原核表达重组载体pET32a(+)-AcPIP2-4构建成功.以重组载体pET32a(+)-AcPIP2-4质粒为模板,通过RT-PCR扩增AcPIP2-4的CDS序列,再将其亚克隆至载体pSP64 Poly(A)上.经酶切鉴定及序列分析,结果表明,重组载体pSP64 Poly(A)-AcPIP2-4构建成功.重组载体pET32a(+)-AcPIP2-4和pSP64 Poly(A)-AcPIP2-4的成功构建,为后续制备抗AcPIP2-4的抗体和AcPIP2-4 c的RNA,进而进行AcPIP2-4的组织表达和功能研究奠定基础.