摘要：目的:基于特异性聚合酶链式反应(PCR)建立一种可以准确、快速鉴别蒙古黄芪、膜荚黄芪种子的方法。方法:利用叶绿体基因组综合数据库(CGIR)及IdenDSS软件分别获取蒙古黄芪、膜荚黄芪的DNA特征片段,在此基础上筛选获得蒙古黄芪与膜荚黄芪的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据该位点设计蒙古黄芪特异性鉴别引物对MG-F/MG-R和膜荚黄芪特异性鉴别引物对MJ-F/MJ-R。分别建立蒙古黄芪和膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法,优化PCR反应体系,并对该方法的专属性和适用性进行考察。结果:蒙古黄芪特异性PCR鉴别方法,采用引物对MG-F/MG-R、退火温度62℃、循环次数28次,经PCR扩增和凝胶电泳后蒙古黄芪在约220 bp处得到特异性条带,而膜荚黄芪和其他混伪品种子无条带;膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法,采用引物对MJ-F/MJ-R、退火温度58℃、循环次数28次,经PCR扩增和凝胶电泳后膜荚黄芪扩增得到约150 bp的条带,而蒙古黄芪及混伪品无扩增产物。结论:该研究建立的特异性PCR鉴别方法,可以准确、快速对蒙古黄芪、膜荚黄芪进行种源鉴别,为黄芪种子的分类与准确鉴定提供了一定的科学依据。

摘要：目的:建立一种同时鉴别九里香药材两基原九里香Murraya exotica和千里香***的DNA分子鉴别方法。方法:通过比较九里香、千里香的叶绿体基因组序列差异,根据叶绿体基因组上的单核苷酸多态性(SNP)变异位点分别设计九里香和千里香的特异性鉴别引物P03和P04,对影响聚合酶链式反应(PCR)结果的退火温度、循环次数、引物浓度比进行优化,建立了九里香和千里香的多重位点特异性PCR鉴别方法,并对影响该方法重复性的Taq酶种类、PCR仪型号进行耐受性考察和适用性考察。结果:在该多重位点特异性PCR鉴别方法中,当PCR反应循环数为31次,退火温度为60℃,九里香P03和千里香P04引物比为1∶2时,九里香可获得约330 bp的特异性条带,千里香可得到约230 bp的特异性条带,不同来源的九里香和千里香样品使用建立的多重位点特异性PCR鉴别方法均可获得一致结果。结论:该文建立一种快速、准确鉴别九里香药材基原的多重位点特异性PCR鉴别方法,可在单次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别九里香和千里香。

摘要：目的:基于特异性聚合酶链式反应(PCR)建立了一种中亚苦蒿药材的鉴别方法,可以准确、便捷地鉴别中亚苦蒿及其近缘种。方法:利用Chloroplast Genome Information Resource(CGIR)数据库查找中亚苦蒿及其近源种叶绿体基因组序列,并筛选获得中亚苦蒿特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点设计一对中亚苦蒿特异性鉴别引物zykh1-F和zykh1-R。采集中亚苦蒿及其常见近缘种的原植物样本,建立中亚苦蒿特异性PCR鉴别方法并优化反应体系,对该方法进行耐受性和适用性考察。利用该方法对从新疆药材市场购买中亚苦蒿药材样本进行鉴别。结果:中亚苦蒿特异性PCR鉴别方法采用鉴别引物zykh1-F和zykh1-R,退火温度为54℃、循环次数为33次。经PCR扩增和凝胶电泳后中亚苦蒿在210 bp处可观察到单一明亮条带,其余近缘种如艾、黄花蒿、白叶蒿、野艾蒿均无条带。结论:该研究所建立的中亚苦蒿特异性PCR鉴别方法可准确鉴别中亚苦蒿及其常见近缘种,具有高度特异性,且该方法节约时间和成本,为中亚苦蒿资源引种和利用提供一种方便快捷的物种鉴别方法。

摘要：目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立五倍子药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法。方法:根据五倍子细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出五倍子的稳定引物区间,并在区间内筛选获得五倍子的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点设计五倍子特异性鉴别引物WBZ-F、WBZ-R,分别收集五倍子及其混伪品,建立五倍子配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR体系,对该方法进行耐受性和适用性考察。结果:退火温度为53℃,循环36次,五倍子及其配方颗粒经PCR及凝胶电泳后,可在约138 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品倍蛋蚜虫虫瘿无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别五倍子药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中的五倍子蚜虫源性成分,也可为其他中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。