摘要：目的　构建抗bcr/ablmRNA的小干扰RNA(smallinterferenceRNA ,siRNA)表达载体 ,转染K5 6 2细胞 ,检测诱导细胞凋亡的变化。方法参照siRNA模板设计原则 ,设计并合成两条siRNA模板序列 ,将其插入质粒pSilencer1.0 U6中得到重组子pBCR6 ,通过限制性酶切和测序鉴定 ,大量制备、纯化 ;以X tremeGENEQ2介导瞬时转染K5 6 2细胞 ,设置空载体作为对照。在转染后不同时间 ,利用原位缺口末端标记法 (TUNEL)、膜联蛋白Ⅴ +碘化丙锭染色法 (AnnexinⅤ /PI)通过流式细胞仪检测K5 6 2细胞凋亡的变化。结果针对bcr/ablmRNA融合区域设计的siRNA模板序列 ,经筛选合成寡核苷酸链后退火形成双链 ,再插入pSilencer1.0 U6 ,经酶切和测序鉴定提示构建成功 ;大量制备、纯化后进行转染 ,在转染后 4 8,72hTUNEL法检测和AnnexinⅤ /PI染色法均显示抗bcr/ablmRNA的siRNA表达载体可有效诱导K5 6 2细胞凋亡 ,且随转染时间的延长凋亡率增高 [转染pBCR6 72h的K5 6 2细胞凋亡率为 (47.80± 1.6 3) % ],与对照组 [(6 .6 7± 0 .37) % ]比较差异有显著性 (P <0 .0 0 0 1)。结论抗bcr/ablmRNA的siRNA表达载体构建成功 ,初步结果显示它可以有效地诱导K5 6 2细胞发生凋亡 ,预期siRNA有望成为慢性髓系白血病分子靶向治疗的一个新工具。

摘要：目的建立一种能够简便、灵敏地检测原发性血小板增多症（ET）及原发性骨髓纤维化（PMF）患者外周血MPLS15突变的方法，探讨我国ET和PMF患者的MPLS15突变频率及JAK2V617F突变情况。方法选取2008至2010年复旦大学附属华山医院ET患者261例和PMF患者25例，提取患者外周血DNA。使用SYBRGreenI荧光定量PCR检测标本的JAK2V617F突变。分别采用针对MPLS15wt、MPLW515L和MPLW515K这3种基因型设计的Taqman探针，使用荧光定量PCR法检测MPLS15突变，并通过T—A克隆挑取纯克隆测序确认。结果在261例ET患者中，检测到JAK2V617F突变119例（45．6％），MPLS15突变7例（2．7％），包括5例MPLW515L突变、1例MPLW515K突变和1例MPLW515L＋K突变。25例PMF患者中，JAK2V617F突变为10例（40．0％），MPL515突变为3例（12．0％），包括1例MPLW515L突变和2例MPLW515L＋K突变。1例MPLW515K突变的ET患者同时伴有JAK2V617F突变。结论JAK2V617F是ET和PMF的分子标志物，而在JAK2V617F阴性的病例中，MPLS15突变则是一个重要、有益的补充。

摘要：目的构建抗bcr/abl mRNA的小干扰RNA(small interference RNA，siRNA)表达载体，转染K562细胞，检测诱导细胞凋亡的变化。方法参照siRNA模板设计原则，设计并合成两条siRNA模板序列，将其插入质粒pSilencer1．0-U6中得到重组子pBCR6，通过限制性酶切和测序鉴定，大量制备、纯化；以X-treneGENE Q2介导瞬时转染K562细胞，设置空载体作为对照。