摘要：目的:构建实时荧光PCR法以测定人类双埃可病毒RNA。方法:通过相关资料自行设计合成人类双埃可病毒引物,将病毒RNA进行反转录之后,进行基于EVaGreen染料的实时荧光定量(Real-time)PCR扩增,通过高分辨率溶解曲线、核酸电泳及产物测序验证PCR结果。结果:对该病毒保守区约260BP片段扩增成功,测序证实为人双埃可病毒序列,建立了该病毒EVaGreen实时荧光PCR检测方法。结论:为人类双埃可病毒的检测提供了一种快速简便的方法。

摘要：目的建立快速检测葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)基因的聚合酶链反应(PCR)方法。方法①根据SEB基因的序列,设计PCR引物特异性扩增靶基因片段。通过对1株产SEB金黄色葡萄球菌和9株对照菌株进行PCR检测,评价该方法的特异性;通过对产SEB金黄色葡萄球菌菌株做10倍系列稀释后进行PCR检测,评价该方法的敏感性;②分析30株金黄色葡萄球菌SEB基因的携带情况。结果①建立PCR方法快速检测SEB基因,扩增产物长度为494 bp。PCR反应体系中有26 CFU的产SEB金黄色葡萄球菌即可检出SEB基因;②30株分离的金黄色葡萄球菌中有2株携带有SEB基因。结论 PCR法可以快速、敏感地检测SEB基因,为金黄色葡萄球菌食物中毒诊断提供依据。

摘要：目的建立PCR方法快速检测葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal enterotoxin A,SEA)基因。方法根据SEA基因的序列,设计PCR引物特异性扩增靶基因片段,对1株产SEA金黄色葡萄球菌和9株对照菌株进行PCR检测,评价其特异性和敏感性。另检测30株金黄色葡萄球菌SEA基因的携带情况。结果建立PCR方法快速检测SEA基因,扩增产物长度为439bp。PCR反应体系中有29cfu的产SEA金黄色葡萄球菌即可检出SEA基因,30株分离的金黄色葡萄球菌中有10株携带有SEA基因。结论 PCR法可以快速、敏感地检测SEA基因,为金黄色葡萄球菌食物中毒诊断提供依据。

摘要：目的建立快速检测葡萄球菌肠毒素C基因（staphylococcal enterotoxin C，SEC）PCR方法。方法根据SEC基因的序列，设计特异性PCR引物，建立扩增体系，琼脂糖凝胶电泳检测扩增的靶基因片段。通过分析产SEC菌株和对照菌株PCR产物，评价方法的特异性；通过对产SEC金黄色葡萄球菌定量样本系列稀释后进行PCR检测，分析方法的敏感性；并运用该方法分析实验室既往检出的30株金黄色葡萄球菌SEC基因的携带情况。结果建立了金黄色葡萄球菌SEC基因PCR快速检测方法，该法PCR扩增产物长度为490bp，未见假阳性结果，特异度良好；灵敏度较高，反应体系中有32cfu的产SEC金黄色葡萄球菌即可检出；30株本地分离的金黄色葡萄球菌SEC基因携带率20％。结论PCR法可以快速、敏感地检测SEC基因，是金黄色葡萄球菌食物中毒诊断可以利用的有效工具。