摘要：根据猪瘟病毒衣壳蛋白(C)基因序列设计一对引物,RT-PCR扩增获得编码猪瘟病毒衣壳蛋白的C基因,将其插入到含有葡萄球菌核酸酶(SN)基因的真核表达载体pcDNA-SN中,筛选获得重组质粒pcDNA-C-SN。脂质体转染猪肾细胞(PK-15),并经G418稳定筛选,通过RT-PCR、免疫印迹和间接免疫荧光鉴定表达的融合蛋白,体外DNA消化试验检测核酸酶活性。结果表明融合蛋白C-SN在PK-15细胞中获得了稳定表达,能够被兔抗猪瘟病毒衣壳蛋白多抗所识别,并具有良好的核酸酶活性,能够对DNA进行切割。同时,稳定表达融合蛋白C-SN的PK-15细胞系中能够有效抑制猪瘟野毒的增殖,使其感染性降低102～103倍。这些结果为进一步将衣壳蛋白靶向病毒灭活策略应用于抵抗猪瘟病毒感染奠定了基础。

摘要：参考Genebank发表的伪狂犬病病毒 (PseudorabiesVirus,PRV)的gI和gE基因序列 ,自行设计并合成了两对引物 ,对PRV上海株 (PRV_SH)进行PCR扩增 ,产物经琼脂糖电泳分析 ,均呈现一条约 96 0bp和 174 0bp的条带 ,将其克隆入pGEM_T_easy载体中 ,进行了序列测定。将PRV_SH株的gI基因与Rice株gI基因比较发现 ,核苷酸的同源性为 94 .7% ,氨基酸的同源性为91.3% ,证实为gI基因。将PRV_SHgE基因序列与Ea株、Ruce株gE基因序列进行比较 ,结果显示 ,该序列与PRVEa株、Rice株gE基因的同源性分别为 98.5 %、97.5 % ;推导的氨基酸序列与Ea株 ,Rice株和I型单纯疱疹病毒 (HSV_1) 17株gE的同源性分别为 97.2 %、94 .8%和 15 .6 %。

摘要：根据GenBank已发表的结核杆菌HSP70的基因序列及O型口蹄疫病毒VP1基因序列,应 甩Primer5．0软件设计了2对引物,其中一对引物用于扩增结核杆菌基因组中的HSP70完整基 因,另一对引物用于以pMD-D为模板,扩增其中的VP1完整基因序列。将所扩增的2段基因串 联插入腺病毒转移载体pAdenovator-CMV5-IRES-GFP的BglⅡ位点,经PCR方法和限制性酶切方法 鉴定2基因已成功插入了转移载体并且插入方向正确,获得了重组腺病毒转移载体pAdenovator- CMV5-IRES-GFP-VP1-HSP,此转移载体可与腺病毒骨架载体进行细菌内同源重组,以产生重组腺 病毒载体。

摘要：用微机辅助设计合成了一对引物，用于扩增传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）中国地方株ＶＰ２基因片段。ＲＴＰＣＲ扩增出一１３２１ｂｐ的目的片段，分子杂交鉴定为ＶＰ２基因。扩增产物经双酶切后插入含噬菌体ＰＲＰＬ双强启动子的ｐＣＹＴＥＸＰ１表达质粒，构建了ＶＰ２基因克隆ｐＣＶＰ２１，经ＤｏｔＥＬＩＳＡ筛选出４个ＶＰ２表达阳性克隆。ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示有一约３２０００的目的蛋白带，且能与ＩＢＤＶ阳性血清结合。

摘要：借助计算机软件，在分析比较了９个传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ａ片段结构蛋白基因的基础上，设计并合成了２对ＶＰ２和ＶＰ３基因ＰＣＲ引物，经ＲＴ－ＰＣＲ反应条件优化选择，成功地建立了ＲＴ－ＰＣＲ方法，用于扩增ＩＢＤＶＶＰ２和ＶＰ３基因，经琼脂糖凝胶电泳和分子杂交鉴定，获得４个ＩＢＤＶ野毒株ＶＰ２和ＶＰ３基因。

摘要：传染性法氏囊病病毒(IBDV)是引起世界养禽业重大经济损失的重要病原之一。至今国外已从分子水平揭示了20多株病毒的全部或部分结构蛋白基因,并进一步揭示了 IBDV 抗原变异是由 VP2基因存在一个高度可变区引起的,不同毒株 VP3基因也有一定差异。单抗ELISA 和血清中和试验表明,中国 IBDV 有多种血清亚型,且与国外毒株存在一定差异。使用现有的疫苗有一定的盲目性。因此了解中国地方株分子流行病学、掌握其抗原变异监测方法及筛选疫苗用病毒编码基因十分必要。PCR 已被广泛地应用于 IBD 基因诊断和克隆表达。但由于中国 IBDV 地方株结构蛋白基因序列至今尚无公开报道。

摘要：原核表达猪盖他病毒(Getah virus)衣壳蛋白(Cap)并制备多克隆抗体。设计一对特异性引物,从含有Cap基因的pT-Cap质粒中扩增全长Cap基因,克隆至携带有His标签的原核表达载体pColdⅠ中,通过PCR、酶切鉴定和序列测定后,重组质粒pCold-Cap转化大肠杆菌Rosetta 2,IPTG诱导后SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白;蛋白经镍柱纯化后切胶免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体。实验表明:经终浓度0.1mmol/L IPTG 15℃诱导24h后,Cap基因在Rosetta 2中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的40.2%,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为32.3kD。Western blot显示制备的鼠源抗血清可以与融合蛋白发生反应,有明显的特异性条带。猪盖他病毒衣壳蛋白原核表达成功,制备的多抗可以识别Cap蛋白。

摘要：从高发病率高死亡率的鸡群中分离到 1株病毒 ,经病毒分离鉴定为 NDV。生物学特性研究证实为强毒株 ,但血凝价偏高。根据保守区设计一对特异性引物 ,经 RT- PCR扩增得到其保护性抗原之一 HN基因 ,包含完整的 ORF。序列测定得到

摘要：利用一对国内自行设计的PCR引物,经反应条件优化,临床样品选择,建立了RT-PCR法,用于猪繁殖与呼吸综合征病原诊断。以模拟临床样品检测,该法敏感度为10TCID50病毒。13个被检猪场中,12个猪场诊断结果与美国IDEXXPRRSV抗体诊断结果相一致。说明该法具有很高的特异性、敏感性和准确性。

摘要：根据已发表的伪狂犬病病毒 (PRV)gE基因序列设计 1对引物 ,用PCR法扩增了PRV上海株 (PRV SH)的 gE基因 ,并克隆入 pUC18中。利用gE基因中限制性酶切位点 ,把绿色荧光蛋白 (GFP)的基因表达盒插入 gE基因中 ,构建了含GFP的载体 pUCgE GFP。