摘要：目的本研究主要探讨肿瘤相关抗原(TAAs)P53、IMPDH、LAMR1和ENO1的自身抗体及其组合在非小细胞肺癌(NSCLC)检测中的潜在价值。方法应用免疫信息学数据库和免疫学软件设计并用固相合成法合成P53、IMPDH、LAMR1和ENO1的肽抗原(hAgs)。收集221名NSCLC患者和243名健康人的血标本,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测NSCLC患者和健康人血清中P53、IMPDH、LAMR1和ENO1自身抗体的水平,对不同病理类型及分期的NSCLC自身抗体的水平进行分析。结果NSCLC患者血清中P53、IMPDH、LAMR1和ENO1自身抗体水平均显著上调(P<0.001),在NSCLC腺癌患者血清中的水平明显高于鳞癌(P<0.05);Ⅰ期NSCLC患者的P53、IMPDH、LAMR1和ENO1的自身抗体水平明显高于健康对照组(P<0.001)。结论肿瘤相关抗原P53、IMPDH、LAMR1和ENO1自身抗体,具有NSCLC的诊断潜能,同时显示出早期NSCLC筛查的潜能。

摘要：肿瘤干细胞对于肿瘤发生发展的研究将会产生很大影响,肿瘤治疗也必将以肿瘤干细胞为重要的靶标来设计方案。本文对结肠癌干细胞的分离方法与信号传导的相关性及结肠癌干细胞的研究进展作一简要综述。

摘要：目的构建人Rac1基因shRNA表达质粒,为提高卵巢癌放化疗的敏感性奠定基础。方法根据GenBank中登录的人Rac1基因序列,应用shRNA设计软件设计并合成用于构建shRNA表达质粒的oligo DNA,构建shRNA重组质粒。将阳性Rac1基因shRNA重组质粒经脂质体介导转染卵巢癌Skov3细胞,48 h后经RT-PCR筛选有效的shRNA重组质粒。结果经限制性内切酶BamHⅠ和PstⅠ酶切鉴定出阳性Rac1基因shRNA重组质粒,序列比对分析结果与理论序列完全一致。RT-PCR检测显示,转染pGPU6/GFP/Rac1-524的Skov3细胞Rac1基因mRNA的转录水平下降。结论已成功构建人Rac1基因shRNA表达质粒,并筛选出有效的干扰质粒pGPU6/GFP/Rac1-524。

摘要：目的构建并筛选小鼠聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)基因的RNAi表达质粒,为肿瘤基因治疗探索新途径。方法根据GenBank中报道的PARP-1基因序列及shRNA设计原则,设计、合成用于构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建4种重组PARP-1RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体LipofectamineTM2000介导转染小鼠Lewis肺癌细胞株。48h后,采用RT-PCR技术检测转染细胞中PARP-1基因mRNA的转录水平,筛选有效的PARP-1RNAi质粒。结果4种重组PARP-1RNAi质粒经酶切及测序证明构建正确。转染后48h,转染质粒pGPU6/GFP/Neo-PARP-1-1308和pGPU6/GFP/Neo-PARP-1-1837的Lewis细胞PARP-1基因mRNA的转录水平降低,转染pGPU6/GFP/Neo-PARP-1-1308组下降更明显,以其作为后续实验的有效质粒。结论已成功构建并筛选出PARP-1基因的RNAi表达质粒,为PARP-1基因RNAi治疗肿瘤的研究奠定了基础。

摘要：目的构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体,并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响。方法根据BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求,应用在线miRNA设计工具http://***/rnaiexpress/,针对大鼠TIMP1基因(GenBank:U06179)的598位点设计、合成Oligo DNA,退火形成双链DNA后,与载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR连接,转化Top10感受态细胞,构建TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体。经PCR扩增及测序鉴定正确后,以脂质体LipofectimineTM2000介导转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6,24、48、72h后收集细胞,应用RT-PCR鉴定TIMP1的表达情况。结果经PCR及测序鉴定构建的TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体正确;将其转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6,48 h即可见TIMP1 mRNA表达量下降,72 h检测不到TIMP1 mRNA的表达,而未转染组及转染pLacZ-miR/GFP(阴性对照)组未见此改变。结论成功构建大鼠TIMP1 miR-NA慢病毒RNAi载体pTIMP1-miR/GFP;pTIMP1-miR/GFP使大鼠肝星状细胞株HSC-T6 TIMP1基因沉默。提示了RNA干扰可使肝纤维化形成过程中的关键因子TIMP1基因沉默,为RNA干扰技术进一步应用治疗大鼠肝纤维化模型奠定了基础。