摘要：背景：胚胎来源干细胞的分化潜能不仅受到诱导条件影响，也受来源胚胎胚龄的影响。目的：实验拟观察不同胎龄大鼠中脑神经干细胞体外诱导向多巴胺能神经元分化能力。设计：随机对照观察。单位：中山大学附属第一医院神经外科。材料：实验于2007—03／2007—09在中山大学附属第一医院实验室完成。成年孕SD大鼠30只，体质量350～400g，由中山大学动物实验中心提供。许可证号码为SCXK（粤）2007—0034。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。DMEM／F12无血清培养液、B27添加剂、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、体积分数为0．1的胎牛血清为英国Gibco公司产品；白细胞介素1α，白细胞介素11、胶质细胞源性神经营养因子购自美国R＆D公司；白血病抑制因子购自英国PEPROTECH公司；酪氨酸羟化酶抗体购自美国Santa Cruz公司；巢蛋白抗体、微管相关蛋白2抗体及胶质纤维酸性蛋白抗体为美国CHEMICON公司产品。方法：①分别于大鼠孕10，12，14，16，18天摸球法随机选取6只，麻醉后处死孕鼠，无菌条件下剖腹取胚胎，分离中脑腹侧脑组织进行神经干细胞培养。在含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中分别培养不同胎龄大鼠脑神经干细胞，经传代扩增后，在含白细胞介素1α、白细胞介素11、白血病抑制因子、胶质细胞源性神经营养因子的诱导分化液中向多巴胺能神经元分化。②诱导分化6d后观察分化细胞生长情况并进行免疫细胞化学鉴定；酪氨酸羟化酶染色标记后通过流式细胞仪检测分化的多巴胺能神经元比率。主要观察指标：①不同胎龄大鼠神经干细胞诱导分化后生长情况及免疫细胞化学鉴定结果。②神经干细胞诱导分化后酪氨酸羟化酶染色阳性细胞的比率。结果：①孕10，12，14，16，18d胚胎大鼠中脑神经干细胞球在诱导分化液中贴壁生长，球内细胞从球体中央逐渐向外呈放射状生长，分化6天的细胞多数有1～2个长突起或有多个短突起。神经球经巢蛋白免疫细胞化学染色，大部分细胞胞浆染色呈阳性。②孕10，12，14，16，18d胚胎大鼠中脑神经干细胞在诱导分化液中培养6d后，流式细胞仪检测其诱导分化成酪氨酸羟化酶阳性细胞的比率分别为（10．3±2．5）％，（21.6±3.4）％．（16．7±2．8）％，（14．2±3.2）％，（8．9±1．8）％，各组间比较差异均有显著性意义（P〈0．05），其中孕12d大鼠中脑神经干细胞诱导分化成多巴胺能神经元比例最高。结论：不同胎龄大鼠中脑的神经干细胞体外诱导向多巴胺能神经元分化的能力不同，以孕12d诱导分化成多巴胺能神经元比例最高。

摘要：背景：近年来通过筛选不同细胞因子的诱导分化作用发现，某些特定的细胞因子配伍可明显诱导中脑神经干细胞体外定向分化成多巴胺能神经元，研究还发现神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元可以有效应用于移植治疗帕金森病，为提高其体内移植的疗效，目前迫切需要深入研究神经干细胞诱导分化的生物学特性。目的：探讨大鼠神经干细胞在分化液中诱导不同时间后，其体外分化成多巴胺能神经元的效应。设计：单一样本观察。单位：中山大学附属第一医院神经外科。材料：实验于2007-05／10在中山大学附属第一医院完成。选择清洁级孕14d的健康SD大鼠6只，体质量350～400g，由中山大学动物实验中心提供（许可证号码SCXK（粤）2007．0034）。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。方法：①在含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中培养胚胎大鼠中脑神经干细胞。②经传代扩增后，在含白细胞介素1a、白细胞介素11、白血病抑制因子、胶质细胞源性神经营养因子的诱导分化液中向多巴胺能神经元分化。③诱导分化2，4，6，8，10d后，流式细胞仪检测分化细胞中酪氨酸羟化酶阳性细胞的比值。主要观察指标：①大鼠神经干细胞诱导分化后细胞形态的变化。②诱导不同时间的大鼠神经干细胞分化成酪氨酸羟化酶阳性细胞的比值。结果：在诱导分化液中大鼠中脑神经干细胞球呈贴壁生长，球形结构开始塌陷，球内细胞从球体中央逐渐向四周分化扩展出较多形态各异的细胞，分化6d后，多数细胞已生长出一两个长突起及多个短突起。免疫细胞化学显示分化的细胞中含有酪氨酸羟化酶染色阳性细胞，流式细胞仪检测诱导分化2，4，6，8，10d的分化细胞中酪氨酸羟化酶染色阳性细胞的比例分别为（3．2±0．9）％，（6．8±1．6）％，（16．7±2．6）％，（14．8±1．8）％，（12．2±2．5）％，各组间差异有显著性意义（F=26．449，P〈0．05）。结论：诱导时间对大鼠中脑神经干细胞体外分化成多巴胺能神经元的能力存在影响，诱导6d的神经干细胞分化成多巴胺能神经元的比例最高。

摘要：背景：目前神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植治疗帕金森病仍面临细胞存活率低的问题,大部分细胞因氧自由基形成及脂质过氧化而发生程序性凋亡。目的：探讨白藜芦醇对神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植至帕金森模型鼠后的细胞存活及移植效果的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-10/2008-06在中山大学动物实验中心完成。材料：成年健康雄性SD大鼠32只,随机分为模型对照组、多巴胺能神经元组、白藜芦醇组、联合组,8只/组;孕十四五天的健康SD大鼠4只,取胎鼠用于神经干细胞的分离培养。白藜芦醇为深圳晶美生物工程有限公司产品。方法：取体外分离培养的胎鼠中脑神经干细胞,在含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中传代扩增后,在分化液中诱导向多巴胺能神经元方向分化。各组大鼠均应用6-羟基多巴胺制备帕金森病模型。采用两点移植法,多巴胺能神经元组向大鼠毁损同侧纹状体注入多巴胺能神经元细胞悬液3μL（1×105个/μL）;白藜芦醇组注入40mg/L白藜芦醇3μL;联合组注入40mg/L白藜芦醇3μL＋多巴胺能神经元细胞悬液3μL（1×105个/μL）;模型对照组注入DMEM/F12细胞培养液3μL。主要观察指标：胎鼠神经干细胞诱导分化的酪氨酸羟化酶染色阳性细胞率,细胞移植后帕金森模型鼠不对称旋转行为的变化,纹状体移植区酪氨酸羟化酶染色阳性细胞存活情况。结果：流式细胞仪检测诱导分化6d的细胞中酪氨酸羟化酶染色阳性细胞率为（17.8±4.2）%。与模型对照组比较,联合组大鼠移植后10d不对称旋转行为有显著性改善（P〈0.01）,移植后20d不对称旋转圈数开始明显下降（P〈0.01）。移植后10~60d,联合组大鼠的不对称旋转圈数明显低于多巴胺能神经元组（P〈0.01）。白藜芦醇组、模型对照组均未见酪氨酸羟化酶染色阳性细胞,联合组酪氨酸羟化酶染色阳性细胞数明显多于多巴胺能神经元组（P〈0.01）。结论：胎鼠神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元移植至帕金森模型鼠后,白藜芦醇可提高纹状体移植区植入细胞的存活率,改善大鼠不对称旋转行为。

摘要：目的:评估聚合酶链反应(PCR)技术检测通过活检或手术获取的肠道组织石蜡标本中结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA在鉴别克罗恩病(Crohn disease,CD)和肠结核(intestinal tuberculosis,ITB)中的可行性及价值。方法:根据来自MTB的重复插入序列IS6110设计引物,用PCR技术检测CD与ITB肠道组织蜡块标本中MTB DNA,利用基因直接测序法验证结果,分析PCR检测结果与病理特征间的关系。结果:ITB组MTB DNA检出率为32%,CD组MTB DNA检出率为0%,MTB DNA PCR法在ITB和CD鉴别诊断中的灵敏度为32%,显著高于抗酸染色(8%)和干酪样坏死(12%)(P<0.05)。MTB DNA PCR法在ITB和CD鉴别诊断中的特异度为100%,阳性预测值为100%,阴性预测值为59.5%。MTB DNA PCR阳性率在肉芽肿或多核巨细胞病理特征的标本中存在升高趋势,但差异无统计学意义。测序结果与PCR判读的结果相符。结论:PCR法用于MTBDNA检测,有助于ITB确诊,在ITB和CD的鉴别诊断中不失为一种方便快捷的病原学诊断方法。

摘要：目的评估和比较含依卡倍特钠的四联疗法与含铋剂的四联疗法根除Hp的疗效和安全性。方法采用多中心、随机盲法、阳性药物平行对照试验设计。研究对象为2009年6月至2011年6月在西安、北京、上海、广州4个城市8家医院就诊的慢性胃炎患者，分为试验组和对照组。试验组每日2次，每次口服奥美拉唑镁20mg、克拉霉素500mg、阿莫西林1000mg、依卡倍特钠1．0g，疗程10d。对照组每日2次，每次口服奥美拉唑镁20mg、克拉霉素500mg、阿莫西林1000mg、枸橼酸铋钾220mg，疗程10d。在治疗第38天时以^13C或^14C尿素呼气试验结果判断Hp根除情况并计算根除率。记录和分析出现的不良反应。统计学处理采用X^2检验和Fisher精确概率法。结果共人组311例患者，试验组155例，对照组156例。按方案分析显示，试验组和对照组Hp根除率分别为75．71％（106／140）和77．37％（106／137），差异无统计学意义（X^2=0．106，P=0．745）。按意图治疗分析显示，试验组和对照组Hp根除率分别为68．39％（106／155）和67．95％（106／156），差异无统计学意义（X^2=0．007，P=0．934）。试验组和对照组的不良反应发生率分别为20．00％（31／155）和25．64％（40／156），差异无统计学意义（Fisher精确概率法，P=0．280）。两组均未见严重不良反应。结论含依卡倍特钠的四联疗法根除慢性胃炎患者Hp的疗效和安全性与含铋剂的四联疗法相同。