摘要：在定向克隆和序列分析试验中,白肋烟(Nicotiana *** Burley)为繁殖寄主,根据美国NCBI核酸数据库中CMV基因组RNA1,RNA2和RNA3基因序列,共设计3对特异性引物。对3对特异性引物进行PCR扩增,分别得到3.3 kb的RNA1、3.0 kb的RNA2和2.2 kb的RNA3 PCR扩增产物。M-CMV基因组cDNA经过序列测定,3条链的长度分别为:M-CMVRNA1全长3 361 bp,分子量为111 kDa的1a蛋白;RNA2全长3 037 bp,含有两个分子量为96.7 kDa的2a蛋白和分子量为13.1 kDa的2b蛋白;RNA3全长2 215 bp,分别编码分子量为30.5 kDa的3a蛋白和分子量为24 kDa的外壳蛋白(cp)。这是继国内CMV-CD、CMV-CA全序列报道之后的首次M-CMV全序列分析,为以后采用基因突变、置换方法观察寄主的症状变化做了前期工作。

摘要：兰花褐斑病菌(Acidovorax ***)是兰花上一种重要进境检疫性有害生物,可通过植株和种子远距离传播,其传染性强,对兰花危害性大。根据核糖体ITS序列设计了TaqMan-MGB探针并建立了实时荧光PCR检测方法。该方法能够特异性检测兰花褐斑病菌,所有供试的目标菌株检测结果均为阳性,而其它28个对照菌株(含同属内其它种及avenae种下其它亚种)均为阴性。利用该方法从发病兰花植株总DNA中检测到该病菌。本方法灵敏度高,检测极限达9×10-9μg DNA,操作方便快速,结果可靠,适合于口岸兰花的进出境检疫及兰花种苗健康质量控制。

摘要：南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)是我国二类检疫性有害生物,以南方菜豆花叶病毒日本分离物(SBMV-J)总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增病毒外壳蛋白基因及其上游基因的cDNA片断并将其克隆到pMD18-T载体上。序列分析结果表明:SBMV-J cp基因由801个核苷酸组成,编码266个氨基酸,SBMV-J与其它分离物及株系cp基因的核苷酸序列同源性为83%～97%,氨基酸序列同源性为86%～97%。由于SBMV各分离物及株系cp基因的同源性较低,难于设计出较长的普通PCR引物。通过较短引物设计和TaqMan-MGB探针技术,建立了SBMV的实时荧光RT-PCR一步检测方法。该方法的检测低限是0．16 pg,最佳检测总RNA的量是0．16 ng。

摘要：通过生长性试验、症状观察、PCR扩增及序列测定,从一批进境的大丽花种子上发现大丽花花叶病毒(Dahlia mosaic virus,DMV)。序列比对结果表明,发现的DMV分离物与DMV-D10存在较近的亲缘关系。根据已报道引物P3/P4的测序结果,并将其与已有的DMV序列进行比对,设计1对预期扩增片段为750 bp的检测引物P5/P6。实验结果证实,P5/P6的扩增效率优于已报道的引物P1/P2和P3/P4,适用于DMV的分子检测。

摘要：南方菜豆花叶病毒属Sobemovirus包括13个确定种和4个暂定种~[1],其中南方菜豆花叶病毒 Southern, bean mosaic virus(SBMV)和藜草花叶病毒 Sowbane mosaic virus(SoMV)已列入. 该属中部分成员为种传病毒,研究其通用检测方法可降低其传人风险. 本研究根据该属病毒RNA复制酶(RNA dependent RNA polymerase, RdRp)的保守区域设计1对简并引物,建立了该属病毒的通用检测方法

摘要：本研究测定了抗病毒转基因木瓜品系55-1、GMYK和华农1号的结构特征序列,并根据测序结果设计、合成了结构特异性检测引物,建立了55-1、GMYK和华农1号的结构特异性检测方法。为提高检测效率,将结构特异性检测引物和内源基因检测引物置于同一反应体系之中,建立了转基因木瓜品系的两重PCR检测方法。本研究建立的PCR检测体系可用于进口木瓜的检测,从中发现未经我国批准的转基因木瓜品系,为转基因产品的标识管理提供技术支持。

摘要：根据苹果茎沟病毒(ASGV)各分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3’端具有小沟结合分子(Minor groove binder, MGB),提高了探针的Tm值,缩短了探针长度,解决了病毒各分离物之间基因组变异较大、难以找到较长一致的序列来设计探针的困难。该方法的检测灵敏度比常规RT-PCR电泳检测高约10倍,对于ASGV等在果树体内含量较低的病毒尤为适用。此方法快速、灵敏,整个检测过程完全闭管,无需PCR后处理。

摘要：豇豆重花叶病毒(Cowpea severe mosaic virus,CPSMV)是我国进境植物检疫性有害生物,本研究根据CPSMV的外壳蛋白基因序列设计引物,以期建立CPSMV的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法。条件优化后,建立了CPSMV的RT-LAMP方法,该方法可将CPSMV与同属其他病毒准确区分,具有良好的特异性。灵敏度试验显示,RT-LAMP比普通RT-PCR灵敏度高10倍。说明本研究建立的RT-LAMP方法适用于CPSMV的快速、特异和灵敏的检测。

摘要：南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)是葫芦科作物上一种重要的种传病毒。本研究根据其外壳蛋白(CP)基因设计一对特异引物,建立了SqMV的RT-PCR和IC-RT-PCR检测方法。特异性检测结果表明,所建立的方法可将SqMV与同一个病毒属的其他病毒及健康寄主植物准确区分开来,具有良好的特异性。在此基础上,建立了SqMV的IC-RT-PCR检测方法,其灵敏度则比DAS-ELISA方法提高10倍以上。所建立的方法具有良好的特异性和灵敏度,适用于进出境植物繁殖材料的快速检测。

摘要：小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellowmosaic virus,ZYMV)是葫芦科作物上的一种重要病毒,近几年来已成了我国葫芦科作物上的一种重要病原物。根据已知的ZYMV基因组序列分别设计了2对特异性引物,在优化RT-PCR条件的基础上,成功建立了ZYMV的RT-PCR检测方法。引物ZYM1/ZYM2用于扩增整个CP基因序列(片段长度949 bp),而引物ZYM3/ZYM4用于扩增部分CP基因序列(片段长度449 bp),其中,引物ZYM3/ZYM4的检测灵敏度比引物ZYM1/ZYM2的检测灵敏度高。把所建立的方法用于南瓜(Cucurbita mos-chata)、丝瓜(Luffa cylindrica)病叶的检测,结果在这些病叶中也检出ZYMV。因此,该方法可用于ZYMV的快速、灵敏检测及分子流行病学的调查研究。