摘要：发酵饮品中目标菌种的定量检测对其质量与安全有着重要的意义。为了将发酵果汁中的嗜酸乳杆菌准确定量,采用现阶段食品微生物检测中广泛运用的分子学方法——荧光定量PCR法进行测定。根据嗜酸乳杆菌基因保守区域的序列设计其特异性引物和探针,以基因组纯化试剂盒提取纯化目标菌株的DNA为模板,利用荧光定量PCR方法先对模拟样品实施检测并制作出标准曲线,得到的相关系数为0.992,线性关系良好,可依此进行未知样品检测。最终检测出未知样品即发酵果汁中嗜酸乳杆菌的含量为2.27×10^(8) CFU/mL,并与平板计数结果基本一致。由此表明,荧光定量PCR法可快速准确地对发酵果汁中嗜酸乳杆菌实现定量检测。

摘要：建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的主要病毒之一。本研究根据NCBI登录序列号(AB197937)的CymMV-TGB1,-TGB2基因分别设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从感染CymMV蝴蝶兰病叶中扩增TGB1,TGB2基因,并将目的基因插入pGEX-4T3中,构建相应的原核表达载体。将表达载体转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后成功表达出目的蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测证实目的蛋白分别是融合GST的CymMV TGB1和TGB2蛋白。两个蛋白的表达为下一步抗体制备以深入开展CymMV TGB1和TGB2功能研究奠定了基础。

摘要：齿兰环斑病毒(Odontoglossum ring-spot virus,ORSV)和建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)复合侵染兰科植物的现象在自然界中非常普遍。通过设计一对简并引物可以同时扩增获得复合感染的兰科植物中两种病毒核酸片段(CymMV约558 bp,ORSV约825 bp),由此建立一步式免疫捕获-反转录-聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)技术以检测2种病毒的复合侵染情况。利用该技术对来自广东汕头的35株兰样进行感病性测试,发现31株呈阳性,感病率为88%。阳性株中,ORSV感染率为87%(27株),CymMV感染率为29%(9株),复合感染率16%(5株),说明这一地区ORSV感病率较高,并与CymMV存在明显复合感染。扩增条带T载体克隆测序表明,与已知CymMV和ORSV分离物的核酸分子平均同源性分别高达97%和99%。