摘要：目的:用荧光标记核酸序列测定技术分析患者携带的HBV基因型,判断所携带的HBV亚型以及治疗过程中是否产生耐药性。方法:采用PCR产物直接进行核酸序列分析,使用计算机模拟核酸杂交技术分析HBV基因的亚型与耐药基因。结果:扩增产物的核酸序列分析表明,设计的引物序列在确定的条件下可以特异性的扩增HBV相应的基因片段。患者耐药基因分析结果分别为HBVYVDD变异和YIDD变异;病毒亚型分析结果提示患者携带的HBV均为adr亚型。结论:本方法能够准确判定HBV的YVDD与YIDD变异及其它类型突变,并确定患者携带HBV的基因型,能够准确、客观地反映出病原体的耐药性,可以作为合理用药的重要参考依据。

摘要：目的探索高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术在检测肺癌组织及血清表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变中的应用。方法收集85例非小细胞肺癌石蜡包埋组织(FFPE)标本及对应的39例血清标本,分别提取DNA,自行设计引物,优化扩增体系,利用HRM技术进行EGFR基因18～21外显子突变检测,对检测出突变阳性的标本扩增片段进行基因测序。统计39例FFPE标本与血清标本突变结果的符合率并分析EGFR基因突变与临床特征的关系。结果 85例FFPE标本中,HRM法检测出EGFR基因突变共48例,总突变率为56.47%,基因测序检测出EGFR基因突变共44例,其中181、9外显子突变类型各一种,基因型分别是G719S和2236-2250Del;20、21外显子突变类型各两种,20外显子突变基因型为插入突变insGGT和无义突变Q787Q,21外显子突变基因型为L861Q和L858R。39例血清与FFPE配对标本,EGFR基因突变阳性标本检出的符合率为92.31%(12/13),阴性标本为100%(26/26)。EGFR突变常发生于女性患者、非吸烟患者、肺腺癌患者(均为P<0.05),临床分期Ⅰ-Ⅱ与Ⅲ-Ⅳ的患者EG-FR基因突变无显著性差异(P=0.159)。结论本研究表明HRM技术能准确检测NSCLC患者组织或血清EGFR基因突变,快速、经济,可有效减少污染,适宜临床推广应用。

摘要：目的建立一种海洋致病性弧菌的快速诊断方法,为海洋性弧菌感染的临床检测构建新的技术平台。方法分别针对创伤弧菌vvh A,副溶血弧菌和溶藻弧菌的toxR基因设计扩增引物和测序引物,并PCR扩增特异性DNA片段,制备单链模板,进行焦磷酸测序,得到的碱基序列经NCBI比对验证;对创伤弧菌16S rRNA基因进行分型。结果创伤弧菌的扩增引物和测序引物均表现出较好的特异性,4株创伤弧菌均扩增出167 bp大小的DNA片段,并且测序结果与NCBI比对达到100%匹配度,而其他菌株未见扩增条带,测序结果为阴性;11株副溶血弧菌和溶藻弧菌均分别扩增出105 bp和134 bp大小的DNA片段,并且经测序得到与预期相符的DNA碱基序列。4株创伤弧菌中1株属于16S rRNA-A型,其余3株均属于16S rRNA-B型。结论本研究建立的PCR-焦磷酸测序方法是一种短核苷酸序列实时测定的新方法,具有高通量、精确、简单易行的优点,适用于海洋性致病菌及陆地感染细菌的快速精准鉴定。

摘要：实时定量检测中引物二聚体的存在会严重影响检测结果的准确性,本文提出多方面的优化策略,以减少或消除实时定量检测中引物二聚体的集聚。

摘要：目的通过血栓弹力图对血小板功能的检测,探讨急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者服用氯吡格雷经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)后,改用替格瑞洛治疗的血小板反应性。方法纳入济南军区总医院220例ACS行PCI患者,给予氯吡格雷负荷剂量后第5天进行血栓弹力图(thromboela-stogram,TEG)腺苷二磷酸(ADP)抑制率检测,根据患者ADP抑制率是否小于30%分为氯吡格雷抵抗(clopidogrel resistance,CR)组与非氯吡格雷抵抗(non clopidogrel resistance,NCR)组,每组再随机分为替格瑞洛及氯吡格雷2个亚组,采用单组同意Zelen设计调整分组,1个月后复查TEG,观察各组患者ADP抑制率变化情况。并随访患者6个月主要不良心血管事件(major adverse cardiac event,MACE)及两种药物短期不良反应。结果 1个月后复查TEG,CR患者替格瑞洛组ADP诱导的血小板抑制率显著升高[(16.9±8.5)%比(45.4±16.9)%,P<0.01],而氯吡格雷组为[(17.9±7.7)%比(18.4±8.0%),P=0.623],差异无统计学意义;NCR患者替格瑞洛组ADP诱导的血小板抑制率亦显著升高[(45.1±12.5)%与(60.2±12.4)%,P<0.01],氯吡格雷组[(49.1±14.6)%比(49.9±15.0)%,P=0.335],差异无统计学意义。6个月临床随访结果显示,27例MACE患者中,NCR患者氯吡格雷组8例(11.3%),替格瑞洛组4例(7.7%),两组间比较差异无统计学意义(P=0.557);CR患者氯吡格雷组10例(23.8%),替格瑞洛组5例(9.1%),两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,各组间患者累积无MACE生存率差异有统计学意义。Cox回归分析显示,ADP抑制率是减少相对危险度,降低MACE发生率的主要因素,而SYNTAX评分较高是不利因素。CR-氯吡格雷组的MACE风险分别为NCR-氯吡格雷组、CR-替格瑞洛组、NCR-替格瑞洛组的4.53倍(P<0.01)、5.65倍(P=0.01)、6.71倍(P=0.01)。服用氯吡格雷患者MACE风险是替格瑞洛患者的6.08倍(P=0.009)。患者未见心原性死亡、卒中不良事件发生;服用氯吡格雷患者中有9例(7.7%)出现轻度出血,服用替格瑞洛患者12(11.2%)例出现出血,出血发生率比较差异无统计学意义(P=0.239)。出现呼吸困难患者中,服用氯吡格雷2例(1.8%),替格瑞洛9例(8.4%),两组比较差异有统计学意义(P<0.05),呼吸困难均为轻、中度,可耐受。结论替格瑞洛与氯吡格雷相比,能够显著提高血小板抑制率,其对CR患者血小板抑制率提升更明显,可降低患者短期MACE风险,不增加出血风险,但可能增加呼吸困难发生率。