摘要：以质粒 pSVLD3为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增得到1条139bp 的片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组 RNA 中核酶(Ribozyme)区的 cDNA,该核酶具有自身裂解功能,将此片段插入到 pGEM-3Z 中,经筛选、鉴定得到重组质粒 pHDV108,经测序发现有2个碱基变异。以该质粒为模板,通过T7 RNA 聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其自身裂解产物,自裂率达71%。针对核酶唯一的自裂位点,设计并合成1条反义寡核苷酸(ASODN),当在转录反应中同时加入 ASODN 后,核酶的自裂率明显下降,当 ASODN 浓度分别为1、2、4、8和16μmol/L 时,核酶的自裂率分别为28.0%、17.0%、8.0%、2.0%和0.0%,自裂抑制率分别为56.0%、73.0%、88.0%、97.0%和100.0%。结果显示 ASODN 可与核酶的自裂位点区结合,从而抑制核酶的自裂。

摘要：目的　应用表达谱基因芯片技术 ,研究乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原基因启动子DNA结合蛋白 1(SBP1)反式调节基因 ,阐明SBP1蛋白可能的分子生物学功能。方法　设计并合成SBP1基因序列特异性的引物 ,应用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增SBP1基因片段 ,以常规的分子生物学技术将获得的SBP1编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列测定 ,构建真核表达载体pcDNA3 .1(-) SBP1。以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,提取mRNA ,逆转录为cDNA ,与转染空表达载体pcDNA3 .1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析。结果　构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定 ,证实准确无误。提取高质量的mRNA ,逆转录为cDNA ,进行cDNA芯片分析。在 115 2个基因容量的表达谱芯片的筛选中 ,发现有 12个基因表达水平显著上调 ,6个基因表达水平显著下调。结论　应用基因表达谱芯片成功筛选了SBP1转染细胞后差异表达基因 ,为进一步阐明SBP1蛋白可能的生物学功能提供依据。

摘要：目的　研究慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原一级结构的多态性。方法　设计特异性引物 ,自 7例慢性乙型肝炎患者血清中扩增S基因全长或全基因组片段 ,TA克隆法克隆到T载体中 ,随机选择克隆测序。结果　共 2 0个克隆被测序。 2 0个克隆全S蛋白的总一致率仅为 3 2 .0 % ,13株全长为 40 1氨基酸残基的克隆氨基酸一致率为 82 .5 %。患者血清中发现2株克隆编码截短型表面抗原中蛋白 ,在前S1或前S2的免疫决定区或可能的肝细胞结合部位均发现缺失突变。结论　慢性乙肝患者体内存有HBV准种群 ,病毒编码的截短型表面抗原中蛋白可为HBV诱导原发性肝癌提供一种途径 ,应加强对HBsAg一级结构多态性的研究。