摘要：目的探讨阿加曲班用于高容量血液滤过的最佳抗凝剂量。方法采用病例交叉对照研究设计方案，选取10例肾功能不全患者分别进行3次（分别为A、B、C组）高容量血液滤过，抗凝方案：A组阿加曲班首剂量0．05mg·kg^-1·h^-1，追加量0．02mg·kg^-1·h^-1；B组阿加曲班首剂量0．07mg·kg^-1·h^-1，追加量0．04mg·kg^-1·h^-1；C组阿加曲班首剂量0．09mg·kg^-1·h^-1，追加量0．06mg·kg^-1·h^-1。检测治疗前及治疗后1、4和8h患者凝血指标，观察治疗结束时滤器凝血情况和结束后12h内患者的出血事件。结果3组患者均能顺利完成治疗，活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、国际标准化比值（INR）均较治疗前显著升高（P均〈0．05），除B、C组治疗1hTT、INR显著高于A组（P均〈0．05）外，其他各时间点间及组间比较差异均无统计学意义。治疗结束时C组患者滤器凝血程度与其他两组比较有加重趋势，3组患者治疗后均无出血事件发生。结论在抗凝剂量0．02～0．06mg·kg^-1·h^-1内，阿加曲班用于高容量血液滤过是安全有效的。

摘要：为探讨人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 (humanhigh affinitysodium dependentdicar boxylatetransporter,hSDCT2orhNaDC3 )基因在人体内的生理功能及其与疾病的关系 ,借助生物信息学成功地从人肾中克隆了hSDCT2基因 (GenBank接收号 :AY0 72 810 ) .首先将大鼠SDCT2cDNA与人EST数据库进行同源性比较 ,获得具有高度同源性EST片段并用DNAstar软件将它们拼接成EST重叠群 .在重叠群上设计PCR引物从人肾总RNA中用RT PCR扩增出hSDCT2基因并测序 ,然后用软件对其结构特性、组织分布及基因定位进行分析 .序列测定结果显示 ,hSDCT2开放阅读框为180 9bp ,共编码 6 0 2个氨基酸 .蛋白同源性分析表明 ,其氨基酸序列与大鼠及小鼠SDCT2分别有85 %和 87%相同 .二级结构分析显示 ,该蛋白有 12个跨膜螺旋区 .Northern分析显示 ,该基因可在肾、肝、脑、胎盘等多种组织中表达 ,并定位于 2 0号染色体的q12～q13

摘要：目的获得编码人尿酸转运蛋白(humanuricacidtransporter,hUAT)的全长基因。方法从人肾小管上皮细胞株(HK-2)中提取总RNA,根据Genbank中hUAT基因序列设计特异性引物,然后通过RT-PCR法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pEGFP-C1连接,经酶切及序列分析鉴定。结果成功扩增出980bp的hUAT全长基因,克隆到pEGFP-C1载体后酶切分析结果与预期一致,序列分析结果与Genbank上公布的hUAT序列完全一致。结论成功克隆出hUAT基因,序列分析结果完全正确,为对该基因进一步研究奠定了基础。

摘要：目的:利用铜螯合纳米磁珠(MB-IMAC-Cu2+)系统联合基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立一套稳定、可行的技术路线,对尿液中相对分子质量(Mr)<10000的多肽进行系统研究,包括从样品的采集、存放、提取、检测在内的各个步骤。方法:分析了8名健康男性和8名健康女性的尿液标本。针对样本采集、存放、不同提取方法以及实验整个系统稳定性的问题设计不同组,分别检测各组尿液多肽谱并对结果进行评价。结果:在本系统中,观察到健康人尿液Mr<10 000范围内平均有85个信号峰,不同性别组间尿液多肽谱未见明显差异。以MALDI-TOF/TOF检测得到的出峰情况来评价各种可能因素对实验体系的影响,铜螯合纳米磁珠(MB-IMAC-Cu2+)提取多肽效果比较满意;整个实验体系稳定、可靠,重复性好,选择其中所观察的10个峰,变异系数均在10%以内,具有良好的可操作性;室温或者4℃保存最好不超过12 h;5次以内有限冻融对出峰没有影响。结论:本实验所探索、建立的方法为下一步研究尿液多肽组学提供了参考。

摘要：为了克隆人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 (highaffinitysodium dependentdicarboxylatetransporter,SDCT2 ,或NaDC3)基因并研究其生理功能 ,用大鼠SDCT2基因序列作为电子杂交探针对人EST数据库进行电子筛选 ,得到了一系列与大鼠SDCT2序列具有高度同源性的人EST序列 ,将它们拼接成 2个基因重叠群 ,设计特异性PCR引物通过RT PCR扩增得到 2条杂交探针用于筛选人肾cDNA文库 .从肾组织中同时克隆出了人SDCT2基因 2种mRNA变异体的全长cDNA(SDCT2α和SDCT2 β) ,两者 5′端前 3435bp序列完全一致 ,但 3′端长度不同 ,SDCT2 β在第 3435bp以后比SDCT2α多出了 5 85bp的序列 .Northern杂交和RT PCR显示 ,SDCT2α在人肾中的表达丰度最高 ,在肝、脾、胎盘、脑及结肠中也有低水平的表达 .而SDCT2 β主要在肾脏中表达 ,在脾也有低水平的表达 .基因组结构分析表明 ,虽然两种mRNAs均由 13个外显子组成 ,但是SDCT2α的第 13外显子含有 1个poly(A)加尾信号AATAAA ,而SDCT2 β的第 13外显子含有 2个poly(A)加尾信号 .这表明在肾脏和脾脏组织中 ,人SDCT2基因可能通过选择性使用位于第 13外显子不同位置的 2个poly(A)信号而转录出 2种不同长度的mRNA变异体 .

摘要：中西医结合是一门新兴的医学交叉学科,通过对中医、西医两种医学的科学思维、理论体系、诊疗技术的整合和应用,吸收中医药学和现代医药学各自的特色和优势,在中西医结合诊治肾脏病方面取得了长足的进展。但是由于诊断治疗不规范、研究缺乏科学的设计、没有客观的评价指标和判断标准、可重复性差,研究常常达不到预期目的,结果也得不到学术界的认可。因此,制定科学、规范、重复性好的中医症候证型量化评估方法,采用前瞻性随机对照临床试验(RCT)及"真实世界"长期随访队列的循证医学研究,客观、科学地评价中医药单独应用或联合西药应用的有效性和安全性,促进中西医结合诊治肾脏病水平的不断提高,具有重要的意义。

摘要：目的通过构建钠-氢交换蛋白1（NHE-1）小干扰RNA（siRNA）抑制肾小管上皮细胞NHE-1的表达，探讨其对细胞缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法根据人NHE-1全长基因序列设计并合成NHE-1-siRNA，转染人肾小管上皮细胞系（HKC），以无关siRNA转染组作为对照。利用10μmol／L抗霉素A诱导细胞来模拟缺血缺氧环境。用RT—PCR、Western印迹法检测NHE-1的表达。用BCECF／AM、Fluo-3／AM和SBFI-AM标记HKC，通过激光共聚焦显微镜分别检测其细胞内pHi、Ca^2＋和Na^＋浓度的变化。用Hoechst 33342染色技术及AnnexinV／PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化。结果特异性NHE-1-siRNA能有效抑制HKC的NHE-1表达，与无关siRNA转染组相比，NHE-1-siRNA转染组NHE-1 mRNA和蛋白表达水平明显下调（均P〈0．05）。抗霉素A刺激后，2组细胞NHE-1 mRNA及蛋白表达水平显著上调，而NHE-1-siRNA转染组低于无关siRNA转染组；同时NHE-1-siRNA转染组细胞凋亡率（8．9％±2．9％）明显低于抗霉素A处理组（18．8％±3．2％）和抗霉素A＋无关siRNA转染组（17．4％±3．6％）（均P〈0．05）；NHE-1-siRNA转染组线粒体膜电位明显增高；与无关siRNA转染组相比较，NHE-1-siRNA转染组经抗霉素A处理后，细胞内钠离子、氢离子及钙离子增高的幅度较低（P〈0．05）。结论NHE-1-siRNA可抑制肾小管上皮细胞内NHE-1的表达，对抗霉素A诱导肾小管上皮细胞的缺血再灌性损伤有一定的保护作用。其机制可能通过抑制NHE-1表达，延缓细胞内Na^＋的积聚，减轻细胞内钙离子的超载，抑制损伤细胞的线粒体膜电位下降，减少细胞的凋亡。

摘要：目的探讨PCR法获得的shRNA对外源性基因和内源性基因表达的抑制效果。方法选择绿色荧光蛋白(GFP)和大鼠肾脏系膜细胞高丰度表达的纤维连接蛋白(FN)分别作为外源性和内源性基因的靶基因,设计特异性引物,利用PCR扩增获得shGFPRNA和shFNRNA。前者与pEGFP质粒共转染至293T细胞,48h后进行激光共聚焦检测细胞表达GFP阳性率;后者转染至大鼠系膜细胞(RMC)中,48h后提取总RNA逆转录成cDNA,经realtimeRTPCR检测FN的mRNA表达水平,提取细胞总蛋白进行Westernblot检测FN蛋白表达水平。结果PCR获得的shGFPRNA产物能有效抑制外源性基因GFP的表达,抑制效率可达70%±3.2%;shRNA转染组内源性基因FN的表达水平明显下降,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论PCR方法可快速简单、廉价地获得shRNA,对内源性或外源性基因进行特异性抑制。

摘要：目的探讨维持性血液透析患者抗-PF4/H抗体的阳性率,分析影响抗体的危险因素及其与血栓栓塞事件的相关性。方法招募解放军总医院血液净化中心157例患者,分别设计横断面和队列研究,利用统计学方法分析抗-PF4/H抗体水平的影响因素及其与血栓栓塞事件的关系。结果 40.8%(64/157)的患者表现为抗-PF4/H抗体阳性;血清抗体阳性组与抗体阴性组患者既往血栓栓塞事件、抗凝剂类型、每周透析总时间和透析龄等因素差异具有统计学意义(P<0.05);抗体阳性患者血栓栓塞事件发生率高于阴性患者(P<0.05),抗-PF4/H抗体对血栓栓塞的危险度RR=2.349。服用阿司匹林或氯吡格雷的抗体阳性患者血栓栓塞发病率低于未服用抗血小板药物的透析患者。结论本组维持性血液透析患者抗-PF4/H抗体阳性率为40.8%,影响该抗体水平的危险因素包括既往血栓栓塞事件、抗凝剂类型、每周透析总时间和透析龄等。该抗体可以作为血栓栓塞事件的标志物,抗血小板药物对预防抗体阳性患者血栓栓塞事件效果显著。

摘要：目的探讨持续高容量血液滤过治疗过程中影响肌红蛋白清除效果的因素。方法以汶川地震中出现挤压综合征伴有急性肾功能衰竭的3例伤员作为研究对象,均行高容量连续性静脉-静脉血液滤过治疗,应用正交设计的方法,以肌红蛋白的实际筛选系数作为评价指标,选取血流量、滤器型号和治疗时间作为研究因素,每个因素分为3个水平:血流量分别为180、220、250ml/min,滤器型号为APF10S、HF1200、AV600,治疗时间为1、4、8h,计算不同血流量、滤器型号和治疗时间条件下滤器肌红蛋白的筛选系数,比较上述因素对滤器的肌红蛋白筛选系数的影响。结果不同治疗时间的肌红蛋白筛选系数有明显差异(P=0.028),随着治疗时间的延长,滤器的肌红蛋白筛选系数明显下降。不同型号滤器对肌红蛋白的筛选系数没有影响(P=0.427),不同血流量对肌红蛋白的筛选系数也没有影响(P=0.117)。结论治疗时间是影响肌红蛋白清除效果的主要因素,定期更换滤器可以提高持续静脉-静脉血液滤过对肌红蛋白的清除效率。