摘要：初步探讨智能图书馆的概念,阐述智能图书馆的设计思想,以及智能图书馆的基本要求、一般特征和应该具备的功能,并提出了智能图书馆的结构布局方法。

摘要：目的基于GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立快速、同时检测5种致泻性大肠埃希菌的方法。方法根据肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)和肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的12种毒力基因的保守序列设计特异性引物,用单组引物分别进行PCR扩增,验证单模板单引物PCR的特异性。分别以5种致泻性大肠埃希菌基因组DNA为模板,每个体系中混合12种引物进行PCR扩增,验证单模板多重PCR的特异性。采用GeXP多重PCR分别扩增10~6、10~5、10~4、10~3CFU/mL的5种致泻性大肠埃希菌混合菌悬液DNA模板,分析该方法的灵敏度。用购自超市和农贸市场的食品制作34份加标样品,采用GeXP多重PCR鉴定5种致泻性大肠埃希菌,并与多重实时荧光PCR检测试剂盒检测结果比较。结果单模板单引物PCR产物中,12种毒力基因sth、pic、bfpB、astA、lt、escV、aggR、stx1、uidA、invE、stx2、stp扩增片段大小与设计相符,荧光信号值良好,均在25000 A.U.以上。GeXP单模板多重PCR体系中,5种致泻性大肠埃希菌的12种毒力基因PCR产物片段大小与设计相符,特异性良好。菌液浓度为10~3CFU/mL时,GeXP多重PCR可同时检测出12种毒力基因,荧光信号强度良好,重复检测结果相同,变异系数<10%。采用GeXP多重PCR检测34份加标样品,检出ETEC 3株,EAEC 12株,EIEC、EPEC和EHEC各1株,与商品化的5种致泻性大肠埃希菌多重实时荧光PCR检测结果一致。结论本研究建立了一种同时检测5种致泻性大肠埃希菌12种毒力基因的GeXP多重PCR方法,可用于致泻性大肠埃希菌的临床鉴别诊断及流行病学调查研究。

摘要：目的利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率。用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性。用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测。结果单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2=0.999)。最低检测的活菌浓度为55cfu/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.98%。35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值。重复试验Ct值变异系数小于5%。30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致。且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5~7d。结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用。

摘要：目的建立快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增技术(RPA)。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立检测副溶血性弧菌的实时RPA方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价方法灵敏度,通过检测不同种属弧菌及其他细菌标准株评价方法特异度,通过重复试验评价方法稳定性,通过实样检测评价方法应用效果。结果建立的实时RPA方法在39℃恒温下20min内完成副溶血性弧菌扩增,最低检测限为5pg/反应,与其他致病菌无交叉反应,不同浓度的副溶血性弧菌DNA模板和大肠杆菌DNA模板隔日3次实时RPA检测结果一致,实时RPA对51份鲜活/冰鲜鱼、虾、贝、蟹类样品的检测结果与GB4789.7—2013《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》检测结果一致。结论建立的实时RPA方法可定性检测副溶血性弧菌,且实验操作及结果判读简单,适用于突发公共卫生事件、食品安全监管中的副溶血性弧菌快速检测。

摘要：目的利用叠氮溴乙锭（ethidium monoazide bromide,EMA）实时荧光聚合酶链反应（PCR）技术,建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法。方法根据志贺菌ipa H基因保守序列设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品EMA前处理条件。用已知菌验证志贺活菌检测的敏感性和志贺死菌检测的抑制性。用31株志贺菌、26株单增李斯特菌、24株沙门菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎肠杆菌、10株致病性大肠埃希菌和1株大肠埃希菌验证方法的特异性和稳定性。同时用本研究方法和常规分离培养法,对30件模拟样品进行实样验证。结果志贺活菌EMA实时荧光PCR方法的循环阈值（Ct）=32.10~3.19×log（菌量）（R2=0.994）。最低检测浓度为2.20 CFU/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.97%。31株志贺菌Ct值最低为15.04,最高为26.54,而97株非志贺菌的Ct值均〉35或无Ct值（呈一条直线）。重复试验Ct值变异系数〈3。30件模拟样品采用本研究方法和常规分离培养法的检测结果一致,但采用EMA实时荧光PCR方法耗时不超过7.5 h,而常规分离培养方法则需要3~5 d。结论 EMA实时荧光PCR技术是一种快速简便、特异性强、灵敏度高、仅检测志贺活菌的方法,建议在食品检测中推广应用。