摘要：为研究不同水平的酵母硒对鲤鱼(Cyprinus carpio)鱼种生长性能、肌肉硒沉积量及抗病能力的影响,试验采用单因子完全随机设计,选用体重约为30 g/尾的鲤鱼鱼种,随机分为5个试验组(A1~A5,A1为空白组)和1个对照组(A6),每组3个重复,每个重复60尾。第A1~A5组分别在基础日粮中添加0、0.15、0.30、0.45、0.60 mg/kg的酵母硒,对照组在基础日粮中添加0.60 mg/kg的亚硒酸钠(Na2SeO3),试验周期为12周。分别对其生长性能指标、肌肉硒沉积量进行测定以及抗病能力进行检测。结果表明:(1)与对照组(A6)和空白组(A1)相比,鲤鱼的末重、增重率及特定生长率(SGR)均随日粮中酵母硒添加量水平的提高逐渐增大,其中以添加0.6 mg/kg酵母硒试验组的结果最高,分别为末重:(94.85±10.13)g,增重率:(217.89±36.12)%(P<0.05),SGR:(2.05±0.2)%/d。饵料系数则随日粮中酵母硒添加量水平的提高而降低,0.6 mg/kg酵母硒试验组的饵料系数最低,为(1.25±0.15);(2)0.6 mg/kg酵母硒试验组的肌肉硒沉积量为所有试验组中最大,为(0.47±0.02)mg/kg;(3)嗜水气单胞菌攻毒后空白组在第12天所有鱼均死亡,其余添加不同组分硒添加剂的试验组均有一定的保护效果,以0.6 mg/kg酵母硒试验组相对保护率最高,为46.67%。综上,在本研究中,在基础日粮中添加一定量的酵母硒可有效促进鲤鱼生长,提高饲料利用率,增加肌肉硒沉积量,提高鲤鱼的抗病能力,添加量以0.6 mg/kg为适宜。

摘要：目的实现拟态弧菌热不稳定性溶血素(VMH)的原核表达,制备兔抗VMH蛋白的多克隆抗体。方法根据GenBank上已有的拟态弧菌vmh基因序列,设计并合成引物,通过PCR方法扩增vmh基因。PCR纯化产物酶切后,定向插入到PET-32a表达载体构建重组表达质粒PET-32a-vmh。重组表达质粒转化至*** Rosetta感受态细胞,在IPTG诱导下进行VMH蛋白表达。SDS-PAGE分析重组VMH蛋白(rVMH)的表达形式,并分别采用兔血平板扩散法和Western blot检测其溶血活性和免疫反应性。用纯化的rVMH蛋白免疫新西兰大白兔,3次免疫后采集免疫血清,采用饱和硫酸铵分级沉淀结合亲和层析法纯化多克隆抗体,并检测其纯度与效价。结果重组表达质粒PET-32a-vmh诱导表达后,经SDS-PAGE分析发现分子量约为77.8kDa的rVMH蛋白主要以包涵体形式表达,该蛋白经变性复性后具有溶血活性和免疫反应性。兔抗rVMH蛋白的多克隆抗体经纯化后,其纯度达95%,ELISA效价为1∶26843545600,琼扩效价为1∶32。结论成功制备了rVMH蛋白及其多克隆抗体,为进一步采用噬菌体肽库筛选技术鉴定VMH蛋白表位提供了物质基础。