摘要：为了建立一种能鉴定大肠杆菌O8、O9血清型的高效、快速的双重PCR方法,参考Gen Bank中大肠杆菌O8、O9血清型的O抗原合成基因簇序列筛选特异性靶标基因并设计合成2对PCR引物,通过优化反应条件,分析双重PCR方法的特异性、敏感性,通过检测大肠杆菌临床分离株验证双重PCR的实用性。结果显示,所建立的双重PCR方法可有效鉴定O8、O9血清型大肠杆菌,对其他血清型大肠杆菌及菌株则无交叉反应,表明PCR方法的特异性好;O8和O9血清型的菌体最低检出限分别为1×10^(3)CFU/m L和1×10^(4)CFU/m L,其DNA最低检出限分别为10 pg/μL和500 pg/μL。临床分离菌株检测显示,双重PCR检测结果与传统血清凝集结果一致。结果表明,本研究建立的双重PCR方法可有效、特异、灵敏、快速鉴定大肠杆菌O8、O9血清型,为大肠杆菌O8、O9血清型检测及其流行病学调查提供了新的技术手段。

摘要：本研究旨在建立β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、酰胺醇类、磺胺类抗菌药物耐药基因的多重PCR检测方法,用于耐药基因的快速检测。根据GenBank公布的上述5类抗菌药物的耐药基因序列,设计17对特异性引物。通过优化PCR体系和反应程序,建立4组耐药基因(cat+floR+tetB+tetC;dfrA 12+sul 2+sul 1+bla CTX-M+bal TEM-1;aac 3+aph 3+aadA 1+strB;tetA+cmlA+strA+sul 3)的多重PCR反应体系。然后,检测多重PCR方法的特异性和敏感性。利用建立的多重PCR方法检测42株禽致病性大肠杆菌的耐药基因,同时,检测其耐药性,比较分析耐药基因和耐药表型之间的相关性。结果显示,建立的4组多重PCR体系可有效扩增出17个耐药基因片段,测序结果表明特异性较好。敏感性结果表明,4组多重PCR体系的菌液敏感性分别为103、104、104和105 CFU。禽致病性大肠杆菌分离株的耐药基因多重PCR和单重PCR检测结果一致,其携带的耐药基因和耐药表型的符合率为92.86%。本研究建立的耐药基因多重PCR方法能简便、快速地检测常见的耐药基因,可用于耐药基因的传播、流行调查。