摘要：目的构建和筛选能高效、特异性抑制人转录辅助调控因子4(positive coactivator 4,PC4)基因表达的siRNA载体。方法设计并合成人PC4基因特异性的4对siRNA干扰靶点,分别克隆入pSES-HUS腺病毒穿梭质粒,构建重组pSES-HUS-PCi1,pSES-HUS-PCi2,pSES-HUS-PCi3和pSES-HUS-PCi4质粒。使用脂质体包裹,瞬时转染293T细胞,qRT-PCR和Western blot检测其对PC4 mRNA和蛋白表达的影响,筛选最佳的重组质粒及干扰靶点,同时探讨其对上皮来源的293T细胞增殖和迁徙的影响。结果构建的4对重组质粒载体经酶切鉴定和基因测序分析,其基因大小、序列与预期相符。将4对重组质粒及pSES-HUS空质粒瞬时转染293T细胞,发现pSES-HUS-PCi1重组质粒组较pSES-HUS空质粒组和正常293T细胞组中PC4 mRNA和蛋白的表达低,且差异具有统计学意义(P<0.01)。可见pSES-HUS-PCi1重组质粒的PC4靶点序列(正义,5'-AACAGAGCAGCAGCAGCAGATTTT-3’;反义,5'-ATCTGCTGCTGCTGCTCTGTTTT-3')能抑制PC4mRNA的表达和蛋白的合成,其抑制率分别是85.30%和80.57%。干扰PC4表达后293T细胞的体外增殖和迁徙能力下降,且以pSES-HUS-PCi1重组质粒组最为明显(P<0.05)。结论成功构建并筛选出高效、特异性抑制PC4表达的siRNA载体,并发现PC4能影响上皮来源293T细胞的增殖和迁徙能力。