摘要：目的建立生物素标记探针和链亲和素磁珠分离人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）-A、-B、-C单体型的技术，以解决HLA分型过程中部分模棱两可的结果。方法根据IMGT／HLA数据库中HLA等位基因的序列信息，设计5’端生物素标记探针。将探针与104份标本基因组DNA混合杂交，然后加入链亲和素磁珠孵育，形成链亲和素磁珠一生物素探针一单链DNA复合物，通过洗涤和解析从而实施有效的分离。对分离出的单体型基因组DNA进行HLA-A、-B或-C位点扩增和测序分析。结果设计的12个HLA-A、19个HLA-B、13个HLA-C位点探针中，经测序证实分别有9个、9个、5个探针成功分离了单链DNA标本。结论建立的探针和磁珠分离HLAA、-B、-C单体型技术具有可行性，可以解决HLA测序分型中部分模棱两可结果，提高分型的准确性。

摘要：目的建立HLA-DPB1基因第2～3外显子测序方法，并分析其多态性。方法根据HLA-DPB1基因序列，设计位点特异性引物扩增242名浙江汉族人群HLA-DPB1第2～3外显子序列，PCR扩增产物经双酶切后对第2和3外显子进行双向测序分析，采用Assign3．5＋SBT分析软件判读HLA-DPB1等位基因型。结果PCR扩增获得特异性的单一目的片段，其产物经直接测序后得到清晰的序列图。242名浙江汉族人群中共检测到18个HLADPB1等位基因，频率超过0．05的等位基因为DPB1＊05：01：01／135：0l（0．4112）、DPB1＊02：01：02（0．1901）、DPB1＊04：01：01（0．1136）以及DPB1＊02：02（0．0620），并确认1个新等位基因DPB1＊168：01。在第3外显子中发现9个多态性位点，其中517A〉T为本实验新检出的1个多态性位点。结论本实验建立的HLA～DPB1第2～3外显子测序方法是可行的，HLA-DPB1第3外显子存在一定多态性。

摘要：目的:建立重亚硫酸盐测序法(BSP法)定量分析ABO基因启动子区CpG岛的甲基化水平。方法:提取胃癌细胞株MKN45和KatoⅢ以及人全血基因组DNA,以重亚硫酸盐转化法修饰其DNA,应用Meth Primer软件在ABO基因启动子区非CpG位点区设计4对特异性甲基化扩增引物,将ABO启动子附近区域的CpG岛分成4个片段分别扩增,优化PCR扩增条件后进行T-A载体克隆和测序分析,采用BiQ Analyzer软件分析ABO基因启动子区CpG岛的甲基化水平。结果:PCR扩增获得了约2kb的完整CpG岛片段,共包含191个CpG位点,测序图谱证实亚硫酸盐转化修饰完全。MKN28细胞株整个CpG岛内191个检测的CpG位点全部甲基化,细胞株KatoⅢ甲基化比例为8.9%,随机标本DNA甲基化比例为30.4%。结论:建立的方法可检测出ABO基因启动子区CpG岛所有CpG位点的甲基化状况,定量分析其甲基化水平。

摘要：目的本研究拟建立KIR2DL1基因分型和抗原分型技术,了解中国汉族人群KIR2DL1基因分布和抗原表达情况。方法收集166份新鲜外周血标本,分离单个核细胞,利用NK细胞特异性的CD56,和KIR2DL1特异性的CD158a抗体流式检测KIR2DL1抗原表达情况。提取标本的基因组,利用PCR-SSP技术检测KIR2DL1基因的有无,对于KIR2DL1基因阳性标本设计3对引物扩增1～9号外显子,并进行全长测序分析。结果1)166份标本中,164份标本KIR2DL1阳性,其中62份标本KIR2DL1和KIR2DS1双阳性,仅2份标本KIR2DS1单阳性。

摘要：目的MHCⅠ类链相关基因B（MICB）是非经典的HLAⅠ类分子,可与NKG2D相互作用调节NK细胞的活性。本研究旨在建立MICB基因2～6外显子的聚合酶链反应-序列测序方法（PCR-SBT）,并分析汉族人群MICB在高分辨基因分型水平上的分布特征。方法根据GenBank数据库MICB基因有关序列（ID NC000006.11）,采用Primer3input计算机软件辅助设计引物,利用聚合酶链反应扩增MICB基因2～6外显子序列片段,扩增片段采用双酶切纯化后,按BigDye terminator v3.1sequencing Kit试剂盒操作进行测序反应,利用Assign3.5SBT分析软件指定等位基因型。