摘要：目的　调查中国汉族人群人类免疫缺陷病毒 - 1协同受体 CC趋化因子受体 - 5 [chemokine(CC) receptor5 ,CCR5 ]编码区的基因多态性位点 ,为艾滋病的防治提供依据。方法　CCR5编码区用两对引物进行 PCR扩增 ,设计测序引物依次测序 ,样本数为 4 2份 ,用 DNAstar分析测序结果 ,寻找单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphism,SNP)位点。结果　在编码区共发现 6个 SNP位点 ,4个引起氨基酸改变 :A184 G、G5 0 3T、G6 6 8A、G999T;1个单碱基缺失 ,引起移码突变和提前终止。 A184 G、G5 0 3T、G999T3个中国汉族人所特有的 SNP位点为首次发现 ,等位基因频率分别为 1.2 % ,39.0 %和 9.5 % ;其中 G5 0 3T分布明显不符合 Hardy- Weinberg平衡。结论　中国汉族人 CCR5编码区 SNP位点有自己的特点 ,与高加索人和非洲人明显不同 。

摘要：核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）是一类具有核酸内切酶活性的ＲＮＡ分子，可特异地切割靶ＲＮＡ序列。核酶的催化中心有相对固定的序列，而切割特异性则由催化中心两侧序列与何种靶分子序列互补而决定。根据核酶这一特性，可以人工设计针对某一病毒ＲＮＡ的核酶分子，破坏病毒转...

摘要：设计一时ＰＣＲ引物，其中上淤引物的５’端除目的基因外，还加Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列。以质粒（ｐＳＶＬＤ３）为模板，通过ＰＣＲ扩增出带有Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列的１３９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能。经测序发现该ｃＤＮＡ有２个碱基变异。以此ＰＣＲ产物为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对该核酶唯一的自裂位点及两个重要的单链区，设计并合成３条反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）。当在转录反应中间时加入合成的３条ＡＳＯＤＮ后，核酶的自裂率均下降较明显，其中，针对核酶自裂位点的ＡＳＯＤＮ效果更突出，当其浓度为４０μｍｏｌ／Ｌ时，核酶自裂率为２％，当浓度为１μｍｏｌ／Ｌ时，核酶的自裂完全消失。结果启示ＡＳＯＤＮ可与核酶的自裂位点区及两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。

摘要：以质粒（ｓＳＶＬＤ３）为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到一条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ｐＧＥＭ－３Ｚ中，经筛选、鉴定，得到一重组质粒（ｐＨＤＶ１０８），经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对核酶两个重要的单链区，设计并合成二条反义寡核背酸（ＡＳＯＮ），当在转录反应中同时加入ＡＳＯＮ后，核酶的自裂率下降均较明显，当ＡＳＯＮ浓度为１６ｕｍｏ１／Ｌ时，核酶自裂抑制率均在７０％以上。提示，ＡＳＯＮ可与核酶两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。

摘要：以质粒 pSVLD3为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增得到1条139bp 的片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组 RNA 中核酶(Ribozyme)区的 cDNA,该核酶具有自身裂解功能,将此片段插入到 pGEM-3Z 中,经筛选、鉴定得到重组质粒 pHDV108,经测序发现有2个碱基变异。以该质粒为模板,通过T7 RNA 聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其自身裂解产物,自裂率达71%。针对核酶唯一的自裂位点,设计并合成1条反义寡核苷酸(ASODN),当在转录反应中同时加入 ASODN 后,核酶的自裂率明显下降,当 ASODN 浓度分别为1、2、4、8和16μmol/L 时,核酶的自裂率分别为28.0%、17.0%、8.0%、2.0%和0.0%,自裂抑制率分别为56.0%、73.0%、88.0%、97.0%和100.0%。结果显示 ASODN 可与核酶的自裂位点区结合,从而抑制核酶的自裂。

摘要：目的:检测原代肝癌组织以及肝癌细胞系中p53的突变位点和频率,了解p53突变与肝癌发病和治疗的关系。方法:设计了3对引物,采用PCR技术扩增p53的5—8外显子,然后进行DNA测序鉴定;共测定了两个肝癌细胞系(BEL-7402和2.2.15)以及两例原代肝癌组织。其中5和6外显子用一对引物串联扩增出来,上游引物序列为:5′-GGAATTCCTCTTCCTGCAG-3′,下游为:5′-GGAATTCAGTT GCAAACCAGAC-3′。然后从5′和3′端分别测定5和6外显子序列。其它外显子则分别扩增测序。结果:在肝癌细胞系和原代肝癌组织均未发现p53基因5—8外显子突变。但扩增BEL-7402细胞DNA的5—6外显子时,除得到5—6外显子串联产物外,还得到了一段新的DNA片段,长度为200bp左右。以5—6外显子串联产物为模板做PCR则不能扩增出上述新片段,说明新片段并非来源于5—6外显子。为此对纯化的新片段重复测序两次,结果完全一致,确定的一段DNA序列(100bp左右)列出如下:^(20CA)GCA CAT GAT GTG AAA AAC TGC CTG CTT CCG AGA AAA TGG GGG TTT CCA AAA CAA TGG AAG TGA TTC TTT GCA NAA GGC TAC TAT TGG GTG GTA CTT TCT TGT^(123)。结论:在检测的4例肝细胞癌中未发现p53的5—8外显子突变,此项工作对我室将要进行的肝癌基因治疗的病例筛选具有重要意义。此外在扩增5—6外显子时意外得到一段新DNA序列,分析表明该序列不存在于p53基因之中,值得做进一步鉴定。

摘要：我们设计合成了针对HBVaywDNA前S2区第110、122和132位碱基的三靶位串状核酶,观察了核酶对靶基因转录产物的体外切割作用,并将核酶重组到逆转录病毒载体上,转染包装细胞PA317,获取了较高滴度的重组病毒,为进一步研究核酶在细胞内及体内的作用奠定了基础。 核酶基因和靶基因的获取:核酶基因分两个片段进行人工合成,片段间部分互补,通过Klenow酶填补连接成105 bp的全片段。

摘要：本文设计合成了针对HBV ayw DNA前S2区第110、122和132位碱基的三靶位串联锤头状核酶基因。经序列分析证明该核酶基因的一级结构与设计序列完全相符。将核酶基因和从含有HBV