摘要：目的采用网络药理学和设计空间法优化北刘寄奴-骨碎补的提取工艺,确定其提取工艺参数范围,提高原药材利用率,减少能源损耗,以达到减少碳排放量和保护环境的目的。方法利用网络药理学方法筛选出活性成分,同时结合《中国药典》2020年版一部相关北刘寄奴、骨碎补项下确定柚皮苷、木犀草素为指标性成分,采用Minitab 17软件进行Plackett-Burman实验设计,初步确定提取次数、提取时间以及加溶媒倍数为关键工艺参数(critical process parameters,CPP),通过软件Design-Expert 10进行Box-Behnken 3因素3水平实验设计,建立关键质量属性(critical quality attribute,CQA)和CPP间的数学模型,最后通过Monte Carlo法计算获得基于概率的设计空间,并对点内、点外进行验证。结果确定最佳提取工艺为乙醇体积分数45%,提取次数3次,每次提取时间2~3 h,加溶媒倍数为11~15倍。结论运用设计空间法优化北刘寄奴-骨碎补提取工艺所得到的理论值与预测值结果接近,表明该法稳定可靠,可避免常规设计方法潜在的过度提取弊端,在大生产中可以节约资源和减少碳排放。

摘要：目的研究木蝴蝶治疗咽炎的物质基础,优化木蝴蝶的提取工艺。方法利用网络药理筛选木蝴蝶治疗咽炎的有效成分,通过分子对接技术进行验证;采用设计空间法优化木蝴蝶的提取工艺;并按木蝴蝶的最佳提取工艺制备木蝴蝶提取物,通过96孔板法验证木蝴蝶提取物的抗菌活性。结果经网络药理学获得槲皮素、黄芩素等有效成分,分子对接结合能均<-5.0 kJ/mol;经设计空间法获得木蝴蝶的最佳提取工艺:加乙醇量为30倍、浸泡时间为30 min、乙醇浓度为30%~70%、提取时间为30~90 min、提取次数为1~2次;经96孔板法获得木蝴蝶提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的MIC值为0.3~0.7 mg/mL,MBC值为10~40 mg/mL。结论网络药理学表明木蝴蝶治疗咽炎的有效成分为黄酮类成分,分子对接构象稳定;设计空间法表明木蝴蝶的最佳提取工艺符合生产实际;96孔板法表明木蝴蝶提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌具有较强的抗菌活性,为进一步开发利用木蝴蝶提供思路。

摘要：为表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白主要抗原表位基因序列,参照GenBank中发表的PRRSV SCQ株M蛋白基因设计并合成一对特异性引物,通过PCR方法从重组质粒pMD18-T-M扩增得到缺失N端跨膜区的M蛋白基因片段dM(deleting M),将其与pMD19-T simple vector连接,经测序正确后克隆至高效原核表达载体pGEX-4T-1,得到重组表达载体pGEX-4T-1-dM,并将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG于37℃诱导,PRRSV M基因获得表达。经SDS-PAGE分析,所表达的融合蛋白分子量约为35 kDa。以纯化的重组蛋白作为抗原,经Western Blot分析结果表明该重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别,可用于PRRSV的检测。