摘要：【目的】设计和构建针对STAT 3基因的siRNA表达框架,并在结直肠癌细胞中观察其干扰效果。【方法】GeneBank中查询STAT 3基因序列,Oligo 6.0软件设计siRNA靶序列,合成并修饰靶序列后PCR扩增siRNA表达框架,通过脂质体介导,直接将扩增产物转染至结直肠癌细胞SW480中,48 h后提取细胞总RNA进行RT-PCR检测干扰效果。【结果】RT-PCR结果显示SW480细胞内靶基因STAT 3 mRNA水平下降(62.16±12.50)%。【结论】本实验成功设计并构建的siRNA表达框架能干扰人结直肠癌SW480细胞内STAT 3基因的表达。

摘要：迁移是学习的一种普遍现象,且已成为教育的基本目标之一。在生物化学网络课程的教学设计中应用迁移规律,通过层次结构、教学程序、内容多维度及自主学习模块的建立,充分利用学生原有认知经验,培养学生迁移能力,使网络教育这一新的教育手段和模式能在现代教育中发挥更大的作用。

摘要：[目的]观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对HT29细胞增殖和凋亡的影响。[方法]针对sur- vivin基因序列设计合成survivin反义寡核苷酸并通过脂质体将其转染至HT29细胞中。噻唑蓝(MTT)法观察survivin ASODN对HT29细胞的细胞毒作用,测定IC_(50);Hoechst33342/PI双荧光染色后,观察转染survivin A- SODN后HT29细胞核变化;流式细胞仪检测细胞周期。[结果]200、400、600、800、1 000及1 200 nmol/L survivin ASODN分别处理HT29细胞44 h后,Ic_(50)值为1 000 nmol/L。200、400、600、800和1 200 nmol/L组抑制率分别为(12.38±7.96)%、(22.30±4.49)%、(26.51 4±3.08)%、(38.90±3.66)%和(63.97±4.50)%。1 000 nmol/L survivin ASODN处理HT29细胞36 h后,经Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到染色质高度浓缩、边缘化,凝集成明亮的团块。流式细胞仪检测1 000 nmol/L survivin ASODN处理HT29细胞36 h后,G_2期细胞显著增多。[结论]Survivin ASODN可显著抑制HT29细胞增殖,诱导其凋亡。Survivin靶向治疗可能成为结肠癌综合治疗的一种重要方法。

摘要：【目的】构建人血管抑素(angiostatin,As)原核分泌型融合表达载体pEZZ18-As,诱导表达As融合蛋白。【方法】根据人AscDNA序列的开放读码框架设计上、下游引物,从人肝组织中提取总RNA后,利用RT-PCR技术扩增As基因;酶切目的基因与pEZZ18载体,回收纯化后做定向克隆连接,转化***5α;XbaⅠ及EcoRⅠ双酶切电泳与测序鉴定pEZZ18-As;诱导培养重组菌,表达目的蛋白。【结果】酶切pEZZ18-As,电泳分析插入片段长度为1111bp,与预期结果一致,对连接点两端进行测序,结果显示接头两端序列连接正确;SDS-PAGE分析诱导培养重组菌,新出现的蛋白大小约61kD,与预期相符。【结论】成功构建人血管抑素表达载体并表达出目的蛋白,该研究为抗血管药物治疗实体瘤奠定了基础。

摘要：目的:探讨STAT3-siRNA对肝癌细胞pim-2基因表达的影响。方法:设计靶向stat3基因的siRNASECs,构建重组表达质粒,在体外基于脂质体来实现介导,对SMMC-7721转染,在对转染效果进行分析的过程中所采用的主要方法为Western blot和半定量RT-PCR分析。结果:转染STAT3-siRNA表达载体后,肝癌SMMC-7721细胞株pim-2 mRNA表达和蛋白表达均明显下降,对照组各指标均无明显变化。结论:siRNA明显抑制了pim-2的表达,并抑制肿瘤生长。作为一个重要的基因沉默工具,未来siRNA有希望变成肝癌治疗的一种新的方法。

摘要：目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌细胞株SW620增殖、凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计、合成反义寡核苷酸并通过脂质体将其转染至人结肠癌细胞SW620中。噻唑蓝(MTT)法观察survivin ASODN对SW620细胞增殖的抑制作用,测定IC50;转染36h后,Hoechst33342染色荧光显微镜下观察检测SW620细胞核变化,RT-PCR检测survivin ASODN处理后SW620细胞中caspase-3mRNA表达,分光光度法检测caspase-3酶活性。结果:转染8h后,SW620细胞中可见黄绿色荧光均匀分布。不同浓度survivin ASODN处理SW620细胞44h后,SW620细胞增殖显著受到抑制,IC50为1×10-6M。2×10-7,4×10-7,6×10-7,8×10-7and1.2×10-6M的survivin ASODN处理后,细胞生长抑制率分别为15.38±0.022%、24.04±0.023%、30.87±0.027%、45.02±0.018%和65.01±0.024%。Hoechest33342染色后荧光显微镜下可观察到染色质凝集并出现凋亡小体,RT-PCR检测到caspase-3mRNA表达上调,另外caspase-3酶活性显著升高。结论靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计合成的survivin ASODN可抑制显著结肠癌SW620增殖、诱导细胞凋亡,其机制与诱导caspase-3表达,提高caspase-3酶活性有关。

摘要：目的利用RNA干扰技术,以信号转导和转录激活因子3(STAT3)为靶基因,设计构建重组体,并进行序列分析鉴定。方法设计一条有小发夹结构的DNA序列,聚合酶链反应(PCR)扩增合成siRNA表达框架(SECs)表达框架,克隆至载体psi Lent GeneTM中构建重组体,转化*** DH5α菌株,提取质粒进行酶切鉴定后测序分析。结果重组质粒经EcoRⅤ酶切、电泳、测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功。结论成功构建了STAT3靶向RNA干扰重组体,为肿瘤的基因治疗在分子水平、细胞水平和整体水平的研究提供一些新方法。

摘要：目的研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中Caspase-3基因的表达。方法体外培养白血病K562细胞,生长曲线观察芸香对K562细胞的细胞抑制作用,MTT法观察芸香的细胞毒作用,测定IC50,Hoechst33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR观察Caspase-3的表达,CaspACETM分析系统检测Caspase-3酶活性。结果芸香浓度为2×10-5mol/L、4×10-5mol/L、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制;不同浓度quercetin处理K562细胞48h后,IC50为4×10-5mol/L;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香处理后细胞发现G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;以Caspase-3基因和内参照β-actin序列设计引物,PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到约300bp条带;CaspACETM分析系统检测Caspase-3酶活性明显升高(P<0.05)。结论芸香诱导白血病细胞Caspase-3基因表达,细胞发生凋亡,caspase-3途径诱导凋亡是芸香作用机制之一。