摘要：目的构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)慢病毒干扰载体,包装病毒后,感染人乳腺癌细胞MCF-7并检测干扰效果。方法针对人ICAM-1基因设计并合成3条靶向短发夹RNA(shRNA)干扰序列(ICAM-1 shRNA1、ICAM-1 shRNA2和ICAM-1 shRNA3)以及一个阴性对照序列(NS),将其克隆入载体p LKO.1-SP6-PGK-GFP中,测序正确后利用3个质粒病毒包装系统(干扰质粒载体-ps PAX2-p MD2.G)转染HEK293T细胞并包装慢病毒。收获病毒上清并测定病毒滴度。将所获病毒感染MCF-7细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测干扰效率。结果菌落PCR结果显示目的片段成功插入p LKO.1-SP6-PGK-GFP载体中,DNA测序证实无误。将所制备之慢病毒感染MCF-7细胞,qRT-PCR和Western blot结果证实ICAM-1 shRNA3组ICAM-1 mRNA和蛋白水平有明显下降。结论成功构建了人ICAM-1基因shRNA慢病毒干扰载体,包装慢病毒后,感染MCF-7细胞可引起ICAM-1表达下调。

摘要：高等教育要重视培养学生的创新能力、实践能力和创业精神,普遍提高学生的人文素质和科学素养。我们以成果导向教育理念(outcome-based education,OBE)为指导,以实验动物科研项目为抓手,在大学生创新训练项目中制定预期学习产出,突出能力培养,在项目实施中强化学生学习的主体地位。实践结果表明,学生自主学习能力、创新和实践能力获得了提升;学生科研思路、科研设计得到系统提高;学生实验动物福利观念得到了加强;学生在标准化实验动物的选择、实验操作技术的标准化等方面有了素质养成;对实验动物和动物实验理论知识和关键技术等方面具有正确的认识和科学的应用。

摘要：目的原核表达海蚯蚓蛋白酶基因,探讨其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法根据环节动物门蚯蚓和单环刺螠丝氨酸蛋白酶c DNA序列多重比对获得的保守序列设计引物,从海蚯蚓肠道组织提取总RNA,经3′RACE和5′RACE技术分别克隆海蚯蚓蛋白酶c DNA序列的3′端和5′端,并进行拼接,对其编码的蛋白质作生物信息学分析;将海蚯蚓蛋白酶成熟肽的编码序列亚克隆至原核表达载体p ET-21a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用组氨酸亲和层析柱纯化;MTT法检测重组蛋白的抗肿瘤活性。结果经3′端RACE技术获得约250 bp的海蚯蚓蛋白酶基因c DNA 3′端序列,再经5′RACE技术扩增获得约770 bp的c DNA 5′端序列,拼接可得海蚯蚓蛋白酶c DNA序列全长为880 bp,其编码蛋白含270个氨基酸,具有高度保守的GDSGGP序列;重组蛋白相对分子质量为27 000,主要以包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的30%,上清纯化后纯度可达95%;重组蛋白酶对人肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用。结论原核表达了海蚯蚓蛋白酶,可明显抑制人肿瘤细胞的增殖,为抗肿瘤基因工程药物的研发提供了实验依据。

摘要：目的构建大鼠淀粉样前体蛋白（APP）695基因真核细胞荧光表达载体，进行细胞转染、表达，为阿尔茨海默病（AD）治疗药物的研究提供一种有效的细胞模型。方法设计并合成APP695基因的引物．以携带APP695基因的真核细胞表达载体pCB6质粒为模板，PCR扩增得到APP695基因全序列：将APP695基因连接到携带绿色荧光蛋白基因的载体pIRES2-EGFP上；应用酶切分析、PCR检测及DNA测序分析等鉴定所构建的真核细胞表达载体。结果以重组载体为模板扩增得到的片段大小与已知APP695基因大小相同，酶切也得到目的基因片段，测序结果显示与已知APP695基因序列相同。结论成功构建了携带绿色荧光蛋白基因的APP695基因真核细胞表达载体,为AD治疗药物的研究提供了一种有效的分子工具。

摘要：目的　初步探寻能够刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳CpG ODN序列。方法　应用正交设计法设计含有不同序列的 10种CpG ODN免疫小鼠 ,以研究影响CpG ODN免疫活性的 6个因素 :免疫时间、CpG基序侧翼核苷酸、5’ poly(A)、硫代修饰、回文结构和CpG 基序数量 ,筛选出最优组合的CpG ODN。结果　 10种CpG ODN与HBsAg一起免疫小鼠均可不同程度地诱导小鼠抗HBsAg抗体水平的变化 ,显示出CpG ODN较强的佐剂效应。结论　CpG ODN与HBsAg一起免疫小鼠可诱导小鼠产生强烈的抗体应答 ,以六个因素均存在时CpG ODN的免疫刺激活性较强 ,即 10号序列 5’ AAAAAACGTTAACGTT 3’为本实验中刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳序列。

摘要：目的构建BCSC-1基因慢病毒RNA干扰载体并感染人乳腺癌细胞MCF-7,实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰效果。方法 设计并合成两条针对人BCSC-1基因的干扰序列(BCSC-1 shRNA1和BCSC-1shRNA2)以及对照序列(NS),将其连接入载体PLKO.1-sp6-pgk-GFP中,得到两个干扰载体和一个阴性对照载体。通过菌落PCR、双酶切和DNA序列测定等方法对其进行鉴定。将干扰载体与辅助包装质粒Lipofectamine2000共转染HEK293T细胞包装慢病毒并收取病毒上清。所获慢病毒颗粒感染人乳腺癌细胞MCF-7,QPCR方法检测两种干扰载体对BCSC-1基因的抑制效率。结果 菌落PCR结果显示目的片段插入PLKO.1-sp6-pgk-GFP载体,DNA测序证实插入序列无误。QPCR结果显示两种干扰载体感染人乳腺癌细胞MCF-7后,BCSC-1 shRNA1组和BCSC-1 shRNA2组BCSC-1基因表达水平分别为0.34±0.046和0.63±0.043,较空白对照组和NS组均有明显下降(P<0.05),且BCSC-1 shRNA1抑制效果优于BCSC-1 shRNA2(P<0.05)。结论 成功构建了两种BCSC-1基因慢病毒干扰载体,两载体均能下调人乳腺癌细胞MCF-7中BCSC-1基因表达水平。

摘要：用聚合酶链反应(PCR)检测脑膜炎双球菌,在该菌染色体DNA中的保守区域中选择一段核苷酸作为靶DNA,用PCR技术进行扩增,经过35个循环后可将1ngDNA扩增到能通过凝胶电泳检测出其596bp的特异性DNA产物,与其设计的该菌核苷酸序列长度一致.该方法对人有致病性的A,B,C 3型细菌均能扩增出阳性结果,且能快速、敏感、特异地检测出脑膜炎双球菌,在临床上具有重要的应用价值和广泛的应用前景.

摘要：目的构建小鼠IL-35基因靶向shRNA干扰的慢病毒表达载体，抑制小鼠肝癌细胞Hepal-6中IL-35的表达。方法设计合成IL-35EBl3亚基基因靶向shRNA序列，构建shRNA载体***，测序正确后，三质粒病毒包装系统（质粒载体＋psPAX2＋pMD2．G）包装成表达干扰IL-35EB13shR-NA的慢病毒，慢病毒感染靶细胞Hepat-6，镟光显微镜下观察感染效率，以实时定量RT—PCR分析对Hepal-6细胞IL-35EBl3基因表达的干扰效果。结果测序证实，成功构建了真核表达干扰载体***；并成功包装出表达干扰IL-35EBl3shRNA的慢病毒，以MOI值4．6pfu／细胞感染Hepal-6细胞，镜下显示感染效率约90％；RT-PCR结果表明所构建的3个慢病毒载体PLKO．1-IL-35EBl3shRNA—GFP均可以有效干扰IL-35EBl3的表达，其中E545干扰效率最高，为64％．结论成功构建IL-35EBl3亚基基因的shRNA慢病毒表达载体，该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。

摘要：在硕士研究生细胞生物学教学中引入Sandwich教学法。分析研究生学习需求,结合细胞生物学学科特点,围绕提高学生的创新能力开展教学实践。在Sandwich教学法应用中,通过设计的问题将学生带入思考,逐步培养学生解决问题的能力、总结能力和探索新知的能力。