摘要：目的克隆人Tim-3基因5′端非编码区处具有启动子活性的片段,构建其真核报告质粒,为进一步研究Tim-3表达调控奠定基础。方法以人基因组DNA为模板,针对人Tim-3启动子5′端非编码区处包括翻译起始点ATG和转录起始点TSS在内的-898^+242片段,设计特异性引物,PCR扩增该片段,命名为Tim-3P2,经双酶切后克隆入pGL3-Basic载体SacⅠ、XhoⅠ位点,构建pGL3-Tim-3P2荧光素酶报告质粒,与内参照pRL-TK用脂质体法瞬时共转染COS-7、RAW264.7和B16细胞系,通过双荧光素酶活性检测确定其启动子活性。结果pGL3-Tim-3P2经PCR、双酶切及DNA测序分析鉴定正确无误;pGL3-Tim-3P2转染RAW264.7和B16细胞(两种细胞均可表达内源性Tim-3)24 h和48h,双荧光素酶活性检测显示其启动子相对活性约为pGL3-Basic空载体的2倍;而pGL3-Tim-3P2转染不表达内源性Tim-3的COS-7细胞后检测不到荧光素酶活性。结论成功克隆并构建含有人Tim-3启动子的真核报告质粒,该载体具有特异性Tim-3启动子活性,为进一步研究Tim-3表达调控奠定了基础。

摘要：绿色施工技术是指通过采用环保材料、节能技术和循环利用等方式,减少对环境的污染和资源的浪费,以实现可持续发展的施工方式。绿色施工技术的创新运用可以推动建筑工程行业的可持续发展,减少对环境的负面影响,提高资源利用效率,降低能耗和排放量。同时,绿色施工技术还能够提高施工过程的效率和质量,减少资源的浪费,通过绿色施工技术的创新运用,可以促进建筑工程行业的技术进步和创新能力的提升。因此,将绿色建筑施工技术合理地应用到建筑工程的实践过程中,有助于提高建筑设计的环保性,并且可以节省能源消耗、减少建筑生产过程中的污染。