摘要：【目的】探索在慢羽鸡成纤维细胞中敲除ev21基因的可行性,净化鸡群内源性逆转录病毒,同时为快速培育缺失ev21基因的慢羽鸡配套系打下基础。【方法】根据ev21基因序列(KY235336)特点,分别在其5’和3’端各设计2个sgRNA,用于构建4种不同sgRNA的打靶质粒,筛选出在5’和3’端打靶效率较高的sgRNA。然后基于CRISPR/Cas9基因编辑技术对ev21基因进行剪切,并通过同源重组方式以红色荧光蛋白(mCherry)的DNA片段(CAG-mCherry)替换ev21基因,实现对慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因定点敲除。【结果】在慢羽鸡成纤维细胞中能检测到ev21基因,构建的4种sgRNA(sgRNA1~sgRNA4)均能成功插入对应的打靶质粒中,经嘌呤霉素筛选及T7E1酶切检测,发现转染4种不同sgRNA打靶质粒后慢羽鸡成纤维细胞均有不同程度的死亡,其中又以sgRNA1和sgRNA3的基因敲除效率较高。同时针对同源位点左右同源臂构建表达mCherry的供体质粒,以其转染293T细胞12 h后均能表达出mCherry。以sgRNA1和sgRNA3打靶质粒及供体质粒共同转染慢羽鸡成纤维细胞,观察发现成纤维细胞内的mCherry持续表达,至转染后第30 d通过流式细胞仪分选收集红色荧光阳性成纤维细胞,并提取其总DNA进行PCR鉴定与基因测序,结果显示红色荧光阳性成纤维细胞中有目的片段(CAG-mCherry)插入,即以插入替换方式能实现对ev21基因的敲除。【结论】基于crispr/cas9基因编辑技术的基因敲除方法能成功敲除慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因,为培育缺失ev21基因的慢羽鸡品系提供技术支持。

摘要：针对全工装样件阶段台架耐久试验车上出现的前侧门在限位器安装位置焊点开裂问题,文章对结构设计及焊点布置进行理论分析及实际验证,以降低限位器安装面处的应力,解决焊点开裂问题。文章通过对比各种方案,寻求零件轻量化与性能指标的平衡,应用CAE软件进行强度及应力的分析计算,总结了限位器加强板设计开发的一些经验教训。

摘要：医学研究表明,人体胃肠道对颗粒达到最佳吸收细度约为15μm,一般中药微粉粒径为10~75μm,中药超微粉粒径为0.1~10μm,目前市场上应用得比较成熟的技术是超微粉碎。本文所研究的中药冲压研磨机结合了机械挤压和超微粉碎技术,能有效提高有效成分的溶出度,提高中药材的生物利用度以及药效的利用率。这类中药研磨设备具有无粉尘、自动化程度高、操作简单等特点,使药品的生产符合国家标准,达到GMP的要求。