摘要：【目的】克隆大鼠胰岛素II基因启动子(RIP2)序列并对其功能进行验证,为培育胰岛特异性表达外源基因的转基因动物奠定基础。【方法】根据Gen Bank中已发表的RIP2序列(J00748.1)设计引物,以大鼠基因组DNA为模板,PCR扩增RIP2序列,连接p MD18-T载体后用Hind III和Bam H I进行双酶切,回收RIP2片段并连接至不含启动子的p EGFP-1载体上构建真核表达载体p EGFP-1-RIP2。重组质粒转染PK15细胞,24 h后观察细胞荧光蛋白表达情况。【结果】克隆获得的RIP2序列与参考序列(J00748.1)的同源性为99.9%,存在3处碱基差异,即从起始密码子ATG(+1)上游-57处有一个G碱基缺失,-387处C突变为A,-707处插入一个G碱基。RIP2序列存在一个TATA-box(-206^-201位点)和一个CAAT-box(-343^-339位点)。以重组质粒p EGFP-1-RIP2转染PK15细胞,24 h后能观察到绿色荧光。【结论】克隆获得的大鼠RIP2序列具有启动子功能,但活性较CMV启动子弱。

摘要：脂联素(AdipoQ)是脂肪组织分泌的一种有活性的物质,其在调节脂肪代谢、脂肪沉积以及对抗胰岛素抵抗、炎症反应、动脉粥样硬化等方面发挥着重要的作用。本研究以Gen Bank家猪脂联素基因序列为参考,利用Oligo7自行设计一对引物,以广西陆川猪皮下脂肪组织cDNA为模板,克隆获得了AdipoQ基因编码区序列(CDS)。序列分析结果显示,陆川猪AdipoQ基因CDS区长为732 bp,可编码242个氨基酸,分子量为26 400.7 Da。信号肽预测显示陆川猪Adipo Q蛋白含有编码17个氨基酸的信号肽,这一预测结果也印证了前人的研究,进一步证实了脂联素为一种分泌蛋白的说法。与GenBank已公布的长白猪(DQ164208.1)、大白猪(DQ164207.1)、广西巴马小型猪(JF730719.1)、梅山猪(DQ164209.1)这四种猪AdipoQ基因CDS区进行序列比较,发现不同猪种间略有差异,而同源性均达98.9%以上。本研究还对克隆获得的陆川猪AdipoQ基因编码蛋白进行了高级结构预测,为后期研究AdipoQ基因调控陆川猪脂肪沉积和肌肉生长发育的分子机制提供理论基础。

摘要：【目的】对陆川猪肌肉生长抑制素(MSTN)基因进行克隆及序列分析,为后期开展MSTN基因表达与陆川猪肌肉生长发育及脂肪沉积的相关性研究奠定基础。【方法】根据GenBank中已发表的猪MSTN基因序列(NM_214435)设计引物,以陆川猪背最长肌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增MSTN基因cDNA序列,扩增片段经纯化、克隆、鉴定和测序分析,并应用生物软件进行蛋白质二级结构预测。【结果】克隆得到陆川猪MSTN基因编码区1128 bp,与GenBank已公布的约克夏、汉普夏、杜洛克、梅山猪、藏猪、广西巴马小型猪的基因同源性均在99.8%以上。陆川猪MSTN基因第294位点存在特有的碱基G,但未引起氨基酸改变。蛋白质二级结构预测结果表明,陆川猪的MSTN成熟肽包含有α螺旋、β转角、延长线和无规卷曲4种二级结构元件。【结论】猪MSTN基因高度保守,可作为研究陆川猪肌肉生长发育和脂肪沉积的候选基因之一。

摘要：【目的】对陆川猪脂蛋白脂酶(LPL)基因进行克隆与序列分析,为后期开展LPL基因表达与陆川猪肌内脂肪沉积的相关性研究奠定基础。【方法】根据GenBank中已公布的猪LPL基因序列设计引物,以陆川猪背最长肌组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增其LPL基因,测序结果用Lasergene 7.0软件进行序列分析,用MEGA 6.0软件进行同源性比较及构建系统进化树,同时利用在线蛋白质结构分析软件(PMP)预测陆川猪LPL蛋白二级结构。【结果】成功克隆获得陆川猪LPL基因编码区长1437 bp,与GenBank中已公布普通猪、大白猪、杜洛克猪、通城猪、贵州白香猪的基因同源性分别为99.6%、99.7%、99.7%、99.7%和99.4%。陆川猪LPL基因第760位点存在特有的碱基A,该突变导致缬氨酸突变为蛋氨酸。由基于LPL基因碱基同源性构建的物种系统进化树可知,广西陆川猪与大白猪的遗传距离最近,其次是山羊,最远的是小鼠。蛋白二级结构预测结果表明,陆川猪的LPL蛋白二级结构包含有N-端结构域和C-端结构域两个区域,且存在PLAT/LH2。【结论】LPL基因可作为研究陆川猪脂肪沉积的主要候选基因之一。