摘要：随着免疫检查点抑制剂和嵌合抗原受体T细胞疗法在不同适应证中的研究和临床应用,免疫治疗已经彻底改变了多种肿瘤的治疗方式。肿瘤新抗原疫苗作为一种前景广阔的免疫治疗方法,旨在激发针对新抗原的特异性T细胞反应。新抗原具有高度特异性,能够诱导和扩展肿瘤特异性T细胞库,即表位扩展。初步临床研究表明,通过快速、经济、高效的合成生物学技术,新抗原肿瘤疫苗已经展现出强大的肿瘤特异性免疫原性和抗肿瘤活性的初步证据。本文详细探讨了肿瘤新抗原的来源、发现与鉴定,以及新抗原疫苗的分类和免疫接种方案。还总结了肿瘤新抗原疫苗的优化策略,包括对预测算法、疫苗结构、免疫原性、给药方式和递送系统等方面的优化,以及联合佐剂、放化疗、免疫检查点抑制剂等方式,为个性化免疫疗法的发展提供了新的思路。

摘要：嵌合抗原受体(CAR)以模块化方式设计,由抗原结合区和铰链组成的胞外区、跨膜区以及一个或多个共刺激分子和激活分子组成的胞内信号结构域构成。将CAR分子导入T细胞,使其具有额外的抗原特异性来重新定向靶细胞,并提供必要的激活信号来驱动T细胞的活化[1]。

摘要：目的:探讨DNA载体途径的RNA干扰技术抑制肿瘤细胞的作用和机制。方法:设计和构建由U6启动子驱动产生hTERT的siRNA表达质粒,转染至ALVA-41前列腺肿瘤细胞,以TRAP-ELISA方法观察细胞端粒酶活性,W estern-b lot检测端粒酶蛋白的表达,细胞记数法检测对细胞生长的影响。结果:构建的针对hTERT基因的U6表达质粒具有明显的干扰效果,受到特异hTERT-siRNA干扰的ALVA-41肿瘤细胞端粒酶表达下调,细胞生长受抑。结论:应用RNA干扰技术可阻止hTERT基因的表达,抑制肿瘤细胞的增殖。

摘要：为分析LRP16基因启动子区顺式调控元件,为深入研究LRP16基因的表达调控机制奠定基础。首先在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5’侧翼区2.6kb的基因组序列,设计PCR引物,从健康外周血单个核细胞中扩增LRP16基因的启动子分子;然后构建包含长度为2.6kb的LRP16基因启动子分子的pGL3-LRP16启动子荧光素酶报道重组子,转染入Hela细胞后检测荧光素酶活性;最后利用Genomatix MatInspector Release professional 5.3、RSA-tools和TESS 3个启动子顺式调控元件数据库对LRP16基因启动子进行分析。结果表明LRP16基因启动子DNA序列具有真核启动子活性,该区域既有通用启动子结构,又具有与肿瘤发生、细胞周期调控和急性反应期蛋白有关的顺式调控元件,包括:Sp1、T-Ag、ZF5、CAC盒、PU.1、c-Ets、XPF-1、IL-6受体、雌激素受体和视黄醇受体。

摘要：背景:LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关。目的:构建针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(EmbryonicStemCell)并筛选同源重组克隆。设计:通过SA-RIES-βgeo插入小鼠LRP16基因组DNA构建插入失活型打靶载体。单位:日本九州大学第三内科生物调控研究室与解放军总医院分子生物室。材料:本实验所用主要材料由日本九州大学生物调控研究室提供。实验所用鼠基因组文库(mousegenomiclibraryinpBeloBAC11Vector)购自invitrogen公司,TopF10感化态细菌购自北京天为时代公司,pCDNA3.1(+)由本室保存。鼠胚胎干细胞株由日本九州大学提供。方法:实验主要工作于2004-11/2005-05在日本九州大学生物调控研究室与解放军总医院分子生物室完成。PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建插入失活型打靶载体并转染胚胎干细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southernblot方法鉴定同源重组胚胎干细胞克隆。主要观察指标:具有同源重组的胚胎干细胞克隆。结果:将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescriptSKII+载体,SA-IRES-βgeo序列的正确插入第五外显子中,打靶载体成功转染胚胎干细胞,Southernblot结果显示具有一个打靶序列同源重组型插入的胚胎干细胞克隆。结论:成功构建了第五外显子插入失活型LRP16基因打靶载体并筛选到同源重组型胚胎干细胞。

摘要：目的 :为深入研究LRP16基因的表达调控机制 ,克隆及亚克隆了LRP16基因的启动子序列 ,构建LRP16基因启动子表达调控载体。方法 :在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点 5′侧翼区约 3kb的基因组序列设计PCR扩增引物 ,从健康外周血中扩增获得该片段 ,以此序列为基础进行亚克隆 ,分别获得 6条 5’端不等、3’端平齐的片段 ,最后插入用于表达调控研究的 pGL3 Basic载体。 结果 :获得了 7条长度依次差别约为 4 0 0bp的LRP16启动子克隆 ,分别构建了调控荧光素酶报告基因的真核表达载体。结论 :上述载体的成功构建为信息资源与实验手段的有效结合克隆启动子序列提出了一种模式 。

摘要：克隆LRP16基因启动子分子,并对启动子特征进行分析,预测启动子区调控元件,为深入研究LRP16基因的表达调控机制奠定基础。在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5'侧翼区2.7kb的基因组序列,设计PCR引物,从健康外周血单个核细胞中扩增;利用Genomatix程序对5'侧翼区近1000bp进行启动子特征分析。获得了与GenBank序列一致、长度为2.7kb的LRP16基因启动子DNA序列,该序列具有典型的真核生物RNA聚合酶II启动子特征及多个核受体结合位点,如α视黄酸受体及RAR相关孤生受体。

摘要：目的:构建人源microRNA-455(miR-455)慢病毒载体,并鉴定成熟has-miR-455在细胞内的表达水平。方法:提取SiHa细胞中的人基因组DNA,设计并合成人miR-455的上下游引物,PCR扩增目的基因,将其中表达miR-455的结构经酶切后插入慢病毒转移质粒pWPT-GFP,构建成pWPT-GFP-pri-miR-455,在293T细胞中与pMD2G、pSPAX2包装产生慢病毒,并用含慢病毒的上清感染SiHa细胞。结果:测序结果证明插入质粒载体中的miR-455前体序列完全正确,慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒;重组慢病毒质粒pWPT-GFP-pri-miR-455感染SiHa细胞后上调miR-455的表达近40倍。结论:构建了miR-455的慢病毒载体,并能在293T细胞中表达,产生的慢病毒能成功感染SiHa细胞。为进一步研究miR-455的功能,以及利用慢病毒进行基因治疗奠定了基础。

摘要：为了利用生物信息学探索网上克隆基因与预测基因功能的新方法,首先用一段1.8kbDNA片段在人类EST数据库中进行电子杂交并对相互重叠的EST片段组装,通过引物设计进行cDNA末端快速扩增。以高通量基因组序列(HTGS)数据库及SAGE文库为基础,进行染色体定位及组织表达分析。通过DAS及RPS-BLAST程序预测其蛋白质结构及功能。结果显示,LRP15cDNA全长1718bp,含一个780bp的开放读码框架,编码259个氨基酸。该基因定位于染色体3p24,在多种组织中表达。其编码蛋白含有N端富含亮氨酸重复序列及潜在的穿膜序列。研究表明,生物信息学是克隆与预测基因功能的有效方法;LRP15基因可能是一个参与细胞发育调控的新基因。

摘要：RNA干涉是近年被广泛关注的一项技术,通过19～21nt的双链核酸介导使靶基因mRNA特异降解,目前已被广泛应用于细胞水平的基因功能研究。通过沉默LRP16基因表达介绍一项利用逆转录病毒介导发夹环样小干扰RNA的策略。首先选择了LRP16基因mRNA翻译起始位点下游+374nt和+668nt位置分别作为小干扰RNA作用靶位点,通过设计21nt的反义序列,构建了pL374和pL6682个以pLPC为骨架的逆转录病毒载体,针对绿色荧光蛋白序列构建pGFPi载体做阴性对照,茎环样结构小RNA由U6启动子驱动转录生成。3个载体分别与VSVG共转染293GP2细胞,包装假病毒,再分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定生成小干扰RNA的细胞。Northernblot实验表明pL374和pL668可分别将LRP16基因抑制90%和60%,为进一步研究LRP16基因功能奠定了基础。另外,首次将mU6启动子序列插入pLPC逆转录病毒载体骨架,将其改造为可介导发夹环样小干扰RNA产生的质粒载体。