摘要：目的建立SYBR Green实时荧光定量PCR方法,以期用于EV71亚型检测。方法根据中国大陆手足口病病原,设计多亚型EV71VP1基因特异性引物,PCR扩增VP1基因片段,并与pEASY-T1载体连接,构建pEASY-T1-VP1重组质粒,以此为标准品进行实时荧光定量PCR,绘制标准曲线,评价方法的敏感性、特异性和稳定性,并利用该方法检测门诊初诊手足口病患者的咽喉拭子标本。结果建立的实时荧光定量PCR标准曲线线性关系良好(R2=0.993),扩增效率为107.1%;方法的检测下限为(8.48×100)^(8.48×101)拷贝/μl之间,变异系数<1%;非手足口病病原体无扩增信号,手足口病患者咽喉拭子阳性率为52.3%(45/86)。阳性样品测序后与NCBI比对,符合率为100%。结论建立的SYBR Green实时荧光定量PCR敏感、特异,可用于多亚型EV71感染的检测。