摘要：目的观察微小RNA-224（miR-224）对前列腺癌细胞DUl45迁移和侵袭能力的影响以及对靶基因Tribbles同源蛋白1（TRIBl）表达的影响。方法通过慢病毒转染前列腺癌细胞株DU145使其过表达miR-224，利用划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力；采用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）和Westernblot检测细胞TRIBl表达水平的变化，并通过荧光素酶实验验证miR-224与TRIBl基因的直接调控关系。设计拯救实验并重新利用划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭。结果划痕实验24h后DUl45—224和DU145-vector组细胞的迁移细胞数目分别为（103．2±20．6）、（189．8±34．7）个，miR-224过表达组细胞迁移能力明显下降（P〈0．01）；Transwell细胞侵袭实验显示，DUl45-224组和DU145-vector组细胞分别为（140．8±13．1）、（283．4±15．4）个，组间差异均有统计学意义（P〈0．01）。过表达miR-224后，DUl45细胞TRIBl的蛋白表达下调（P〈0．05）。荧光素酶报告实验结果显示实验组荧光素酶活性值为0．42±0．06，比对照组（0．97±0．09）显著降低（P〈0．01），提示miR-224能明显抑制TRIB1—3’端非编码区域（3’-UTR）的荧光素酶活性。拯救实验结果表明在miR-224过表达的DUl45细胞中进一步转入高表达TRIBl质粒后，迁移细胞数目为（203．2±31．2）个、侵袭细胞数目为（328．6±25．9）个，对比单纯miR-224过表达DUl45细胞[迁移细胞数目为（73．2-4-17．8）个；侵袭细胞数目为（101．2±13．1）个]，迁移和侵袭能力增强，组间差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论过表达miR-224可能通过靶向降低TRIBl基因的蛋白表达，抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

摘要：目的:探讨双氢青蒿素(DHA)通过氯离子通道抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖的作用及其机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测DHA抑制LNCaP细胞增殖,并确定其半抑制浓度(IC 50值):分别配制的浓度梯度为0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000、40.000、80.000、160.000μmol/L DHA溶液,并按实验设计加入含有LNCaP细胞的96孔板中,在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光度(A)值;全细胞膜片钳:检测DHA激活LNCaP细胞氯电流以及氯通道抑制剂4,4’-二异硫氰酸基-2,2’-二苯乙烯磺酸二钠(DIDS)和5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)抑制LNCaP细胞氯离子电流。依次用0、±40 mV、±80 mV电脉冲刺激细胞,每个刺激间隔时间为200 ms,每个周期间隔为4 s。开始刺激后的10 ms收集和测量电流。通过将电流归一化到膜电容来确定电流密度。组间比较使用独立样本t检验。结果:DHA能够抑制LNCaP细胞增殖,其抑制效果具有时间依赖性,DHA抑制LNCaP细胞增殖的IC 50值随时间延长逐渐降低。在用DHA处理LNCaP细胞24、48、72 h后,其IC 50值分别为(51.34±1.49)、(24.98±2.07)、(22.79±1.38)μmol/L[n=3,t=17.901(24 h比48 h),t=24.349(24 h比72 h),P<0.01]。此外,DHA也能激活LNCaP细胞氯通道产生氯电流,在80 mV电压钳制下,LNCaP细胞的电流密度增加至(48.30±7.52)pA/pF,被激活的电流可被氯通道抑制剂抑制至(6.35±2.47)pA/pF(DIDS)和(9.25±2.09)pA/pF(NPPB)[n=3,t=9.180(DHA比DIDS),t=8.666(DHA比NPPB),P<0.01]。结论:DHA能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,其抑制效果具有时间依赖性;DHA也能够激活LNCaP细胞氯离子通道产生氯离子电流,且激活的氯电流能够被氯通道抑制剂所抑制。