摘要：目的探讨人乳头状瘤病毒（HPV）16型多肽疫苗的制备，并观察HPV16多肽疫苗的体内外效应。方法（1）针对抗原加工相关转运子（TAP）设计HPV16E7蛋白的主要组织相容性复合物I类分子（MHC—I）的抗原结合表位，利用生物信息学分析平台筛选出一致性较高、特异性及亲和力较强的HPV16E7多肽作为研究对象制备HPV16多肽疫苗用于以下研究，本研究共筛选出3段多肽，分别命名为E7Pa、E7Pb、E7Pc。（2）C57BL／6小鼠注射鼠肺上皮细胞株TC-1细胞（为鼠源性的HPV16阳性的肿瘤细胞株）后，采用等额抽取的随机方法分为5组，E7Pa＋二核苷胞嘧啶（CpG）、E7Pb＋CpG、E7Pe＋CpG[均为实验组，分别加入终浓度为50μg／ml的E7Pa、E7Pb、E7Pc和终浓度为12mg／L的刀豆蛋白（ConA）]、CpG（为阳性对照，加入终浓度为12mg／L的ConA）和空白对照组（不做任何处理）。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测各组作用不同时间后小鼠脾T淋巴细胞的体外增殖效应，乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测小鼠脾T淋巴细胞在不同效靶比下的体外细胞毒T淋巴细胞（CTL）活性，实时荧光定量RT—PCR技术检测小鼠肿瘤组织中1干扰素（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2）mRNA的表达水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠外周血中IFN-γ、IL-2的表达水平，通过定期测量比较各组小鼠接种HPV16多肽疫苗后体内肿瘤体积的变化。结果（1）本研究筛选出了一致性较高、特异性及亲和力较强的3段HPV16E7多肽作为研究对象制备HPV16多肽疫苗，分别命名为E7Pa、E7Pb、E7Pe。（2）MTT比色法检测显尔，在接种疫苗24、48、72、96h后，以E7Pa＋CpG组的增殖效应最明显，其细胞增殖率分别为（131±32）％、（302±15）％、（552±28）％、（731±24）％，明显高于空白对照组的（72±15）％、（120±57）％、（176±41）％、（288±29）％（P〈0．01）；E7Pb＋CpG、E7Pe＋CpG、CpC组的细胞增殖率也均明显高于空白对照组（P〈0．05）；但E7Pb＋CpG、E7Pc＋CpG、CpG组间比较，差异则无统计学意义（P〉0．05）。LDH释放法检测显示，效靶比为100：1时，E7Pa＋CpG、E7Pb＋CpG、E7Pe＋CpG、CpG和空白对照组CTL活性分别为（85．9±3．0）％、（55．9±2．5）％、（60．2±1．5）％、（41．0±1．7）％和（4．1±1．0）％，E7Pa＋CpG组与空白对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；E7Pb＋CpG、E7Pc＋CpG、CpG组分别与李白对照组比较，差异也有统计学意义（P〈0．05）；但E7Pb＋CpG、E7Pe＋CpG、CpG组间比较，差异则无统计学意义（P〉0．05）。在肿瘤组织及外周血中，小鼠IFN-γ、IL-2的表达水平，E7Pa＋CpG组与空白对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；E7Pb＋CpG、E7Pc＋CpG和CpG组分别与空白对照组比较，差异也均有统计学意义（P〈0．05）；但E7Pb＋CpG、E7Pe＋CpG、CpG组间比较，差异则无统计学意义（P〉0．05）。小鼠体内的肿瘤体积，各实验组肿瘤生长均明显被抑制，接种后第60大，E7Pa＋CpC组与空白对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；E7Pb＋CpG、E7Pc＋CpG和CpG组分别与空白对照组比较，差异也均有统计学意义（P〈0．05）；但E7Pb＋CpG、E7Pc＋CpG、CpG组间比较，差异则无统计学意义（P〉0．05）。结论在动物模型中，针对TAP筛选的HPV16E7多肽联合cpG制备的HPV16多肽疫苗，可以有效治疗HPV16E7阳性的肿瘤。

摘要：目的 探讨人乳头状瘤病毒（HPV）16型多肽疫苗联合紫杉醇＋顺铂（TP）化疗方案治疗宫颈癌的可行性,并观察其体内外效应.方法 （1）针对抗原加工相关转运子（TAP）设计HPV16E7蛋白的主要组织相容性复合物Ⅰ（MHC-Ⅰ）抗原结合表位,利用生物信息学分析平台结合体内外实验研究,筛选出一敛性较高、特异性及亲和力较强的HPV16 E7多肽,命名为E7Pa.（2）C57BL/6小鼠注射鼠肺上皮细胞株TC-1细胞（为鼠源性的HPV16阳性的肿瘤细胞株）后,采用等额抽取的随机方法将样本分为6组,E7Pa＋CpG＋TP、E7Pa＋CpG、CpG＋TP、TP和CpG组均为实验组及空白对照组（予生理盐水注射组）.通过定期测量,绘制肿瘤生长曲线,比较各组小鼠肿瘤体积的变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠外周血中γ干扰素（INF-γ）、白细胞介素2（IL-2）的表达水平;TUNEL试剂盒检测肿瘤组织的细胞凋亡情况;记录各组动物自接种肿瘤细胞开始至死亡的时间,绘制生存曲线;作小鼠相关脏器病理检查及白细胞计数观察治疗的安全性.结果 肿瘤生长第60天时,E7Pa＋CpG＋TP组肿瘤体积为（0.013±0.010）cm3与空白对照组（1.900±0.075）cm3相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;E7Pa＋CpG组体积为（0.340±0.038）cm3、TP＋CpG组体积为（0.650±0.029）cm3、TP组体积为（1. 100±0.052）cm3,CpG组体积为（0.890±0.047）cm3,分别与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;小鼠的平均生存时间E7Pa＋CpG＋TP组（108.50±8.97）d,E7Pa＋CpG组（100.02±2.27）d,CpG＋TP组（79.63±4.05）d,TP组（73.24±3.11）d,CpG组（68.63±1.38）d,对照组（52.37±2.47）d,E7Pa＋CpG＋TP组及E7Pa＋CpG组平均生存期与对照组比较生存期明显延长,差异有统计学意义（P＜0.01）;同时,免疫治疗组可有效的激发自身免疫系统活化对抗肿瘤细胞的恶性增生,而化疗组可以显著杀伤恶性细胞,诱导凋亡.免疫治疗与化疗的联用明显优于两者单用,可以在充分调动自身免疫杀伤效应的同时增加化疗药物的抗肿瘤效应.在药物副作用的研究中,联合用药与其他实验组差异无统计学意义.结论 在动物模型中,人乳头状瘤病毒16型多肽疫苗联合紫杉醇＋顺铂化疗可以有效治疗HPV16 E7阳性的肿瘤.