摘要：漆酶是一种多铜氧化酶,在食品、纺织、环境修复和造纸等领域有重要应用。为提高漆酶的发酵水平,该研究将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)来源的漆酶(CotA)表达于大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,并分别考察了核糖体结合位点、诱导表达条件及共表达裂解蛋白对其表达效率的影响。结果显示,最优核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)重组菌CotA-RBS5胞内CotA表达水平达到1236 U/L,较优化前提高1.75倍。基于正交实验设计确定了最佳诱导表达条件为:待菌体浓度OD_(600)达到0.8时,加入终浓度为2 mmol/L Cu及0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷后,于30℃诱导。在该条件下,重组菌CotA-RBS5的胞内酶活力提升至7926 U/L,较优化前提升了5.4倍;同时,胞外酶活力达到4984 U/L。共表达裂解蛋白E促进了细胞的裂解。在菌体浓度OD_(600)达到3.5时诱导裂解蛋白E表达,胞外CotA酶活力在发酵30 h达到10283 U/L。研究结果将为漆酶的工业化生产提供了重要的基础数据。