摘要：目的研究靶向血管内皮生长因子(VEGF)基因的外源性miRNA对恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法根据VEGF基因序列设计合成4对miRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测序分析鉴定插入序列的完整性;脂质体法将该4个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28,RT-PCR检测转染细胞中VEGF基因的mRNA表达变化,Western blotting检测miRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应,明确抑制效果最为显著的miRNA干扰序列。MTS法和流式细胞仪分别检测人工合成的靶向VEGF的miRNA对SKmel-28生长的抑制作用,以及对肿瘤细胞凋亡的影响。结果测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确,成功转染SKmel-28细胞后,均能显著抑制肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1,MTS法和流式细胞仪检测显示,SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后,细胞增殖受到明显抑制,增殖抑制效应具有时间依赖性,与阴性对照组比较差异具有显著性(P<0.05),与空白组比较细胞增殖抑制更加明显(P<0.01);肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也显著高于对照组(P<0.01)。结论外源性靶向VEGF的miRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表达水平,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。

摘要：【目的】研究外源性靶向microRNA对恶性黑色素瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的抑制作用,以及对癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。【方法】根据VEGF基因序列人工设计合成4对microRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为:X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测序分析鉴定插入序列的完整性;脂质体法将该四个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28,RT-PCR检测转染细胞中VEGF基因的mRNA表达变化,Western Blot检测microRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应,明确抑制效果最为显著的microRNA干扰序列。MTS和EDU法分别检测靶向VEGF的microRNA对SKmel-28生长的抑制作用,流式细胞仪观察转染对肿瘤细胞凋亡的影响,Transwell检测细胞侵袭和迁移能力变化。【结果】测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确,成功转染SKmel-28细胞后,均能显著抑制肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1;MTS和EDU检测显示,SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后,细胞增殖受到明显抑制,与对照组相比有统计学差异(P<0.05),增殖抑制效应具有时间依赖性,细胞侵袭和迁移能力也显著减弱(P<0.01);流式细胞仪检测显示肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也显著高于对照组(P<0.01)。【结论】外源性靶向VEGF的microRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表达水平,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的体外增殖和侵袭迁移能力。

摘要：目的构建BRAF基因序列特异性的短发卡RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)质粒载体。方法根据文献已发表的BRAF基因序列,设计合成3条BRAF特异性的shRNA编码序列(其中一条shRNA特异性针对黑素瘤中最常见的BRAF V599E错义突变设计)和一条与人基因组无同源性的阴性对照shRNA编码序列。将退火后的双链shRNA编码序列重组于pGenesil-1质粒中,进行双酶切和测序鉴定。结果双酶切显示shRNA编码序列被成功插入pGenesil-1质粒中,测序结果证实插入片断与设计序列完全一致。结论所设计的shRNA编码序列被正确插入质粒骨架,成功构建了BRAF基因序列特异性的shRNA质粒载体。

摘要：目的构建BRAF基因序列特异性的短发卡RNA(shRNA)质粒载体,检测其对人黑素瘤细胞BRAF基因的干扰作用。方法设计2条BRAF基因序列特异性的shRNA编码序列和1条非特异性阴性对照序列,插入质粒pGenesil-1,双酶切和测序鉴定。用构建成功的3条质粒转染人黑素瘤细胞株A375和M14,分别采用RT-PCR和蛋白印迹检测其BRAF基因的mRNA和蛋白表达。结果所设计的shRNA序列被正确插入质粒pGenesil-1。非特异性对照质粒neg对黑素瘤细胞BRAF基因表达不产生干扰,2条序列特异性质粒braf 1和braf 2抑制了BRAF基因mRNA和蛋白的表达,其中braf 1干扰效果最为明显,最高抑制率可达90%。结论质粒介导的shRNA可成功干扰人黑素瘤细胞BRAF基因的表达,其抑制时间可持续至少1个月。

摘要：颧骨、颧弓骨折在头面部外伤骨折中较为常见,手术复位后如无有效地固定固位措施,常可发生轻重不等的骨折段塌陷移位,以致影响面容美观及开口受限。以往文献曾介绍金属杆与复位的骨折骨段共同缝合固定及石膏帽牵引、微形钢板内固定等方法。作者设计、制造的拱桥式骨折骨固位保护架,近年临床治疗10例颧骨、颧弓病人均获满意疗效。 1