摘要：目的:探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor receptor,IGF1R)的短发夹环RNA质粒(pSUPER-siRNA-IGF1R)增加人肝癌细胞株SMMC7721对丝裂霉素诱导细胞凋亡的作用及可能的机制。方法:设计并合成特异性靶向IGF1R的siRNA片段并构建pSUPER-siRNA-IGF1R表达质粒,将其转染SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株。丝裂霉素处理后,通过CCK-8法检测肝癌细胞对化疗药物敏感性的影响,流式细胞术检测各组细胞凋亡指数,Western印迹检测凋亡相关基因的变化。结果:丝裂霉素诱导细胞凋亡的作用明显增强,凋亡指数明显升高(P<0.05)。实验组野生型p53蛋白,bax蛋白表达比对照组明显上调,而bcl-2蛋白表达明显下降。结论:构建的pSUPER-siRNA-IGF1R具有RNA干扰作用,并能增强丝裂霉素诱导的细胞凋亡。

摘要：背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法。本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:设计并合成特异性靶向IGF1R的siRNA片段,构建SMMC7721-IGF1R-siRNA表达质粒,将其转入SMMC7721细胞。通过G418筛选出稳定株,移植裸鼠成瘤。同时设立对照组。根据体积的均数值绘制肿瘤生长曲线,以HE染色法观察质粒处理后瘤组织的病理改变,Westernblot检测肿瘤组织中IGF1R的表达变化,免疫组化SP法检测检测瘤组织内微血管密度,原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤体积与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721组相比差异有统计学意义(P<0.05)。病理学检查及TUNEL检测发现,SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞凋亡指数[(50.2±6.4)%]明显高于SMMC7721-IGF1R-mutation组[(5.4±1.0)%]和SMMC7721组[(6.0±2.1)%](P<0.05)。SMMC7721-IGF1R-siRNA组与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721相比,瘤内IGFIR蛋白表达明显下调。SMMC7721-IGF1R-siRNA组微血管密度(11.3±4.4)与SMMC7721-IGF1R-mutation组(36.7±7.6)、SMMC7721组(28.4±6.5)相比明显下降(P<0.05)。结论:构建的SMMC7721-IGF1R-siRNA具有RNA干扰作用,能抑制SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的生长。

摘要：目的探讨人胰岛素样生长因子1类受体（IGFIR）的短发夹环RNA质粒（pSUPER-siRNA—IGFIR）能否有效抑制人肝癌细胞株MHCC97H侵袭能力并探讨其相关机制。方法设计并合成靶向IGFIR的siRNA片段并构建Psuper—siRNA-IGFIR表达质粒，将其转入MHCC97H、SMMC7721细胞，通过G418筛选出稳定株。通过黏附实验、Boyden小室实验、软琼脂克隆形成实验观察各细胞株侵袭能力的变化并采用明胶酶法测定肝癌细胞的金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的含量，Western blot检测增殖相关基因的变化。并设空白对照组、阳性对照组。结果MHCC97H-IG-FIR-siRNA、SMMC7721-IGFIR-siRNA黏附能力比对照组下降约5倍（MHCC97H）和6倍左右（SMMC7721），细胞迁移能力明显下降，下降各约3倍，细胞克隆形成率明显低于对照组约6倍和8倍，其MMP-2、MMP-9、ICAM-1、LNR、E-cadherin表达比对照组低。结论构建的pSUPER-siRNA-IGFIR具有RNA干扰作用，可抑制肝癌细胞株转移能力。

摘要：目的　克隆和表达日本血吸虫新的分泌蛋白Sjsp16的编码基因。　 方法　根据EST测序的结果设计引物 ,从含有Sjsp16基因的cDNA克隆中扩增得到该编码基因 ,亚克隆入原核表达载体 pET2 8中表达 ,然后用生物信息学的方法对蛋白结构功能进行预测。　结果　成功克隆和表达了日本血吸虫分泌蛋白基因Sjsp16,生物信息学分析提示该基因编码蛋白的N端带有一个信号肽序列 ,是一个分泌蛋白 ,含有一个ML功能结构域 ,具有 4种潜在的功能作用位点 ,即 1个N 糖基化位点、3个蛋白激酶C磷酸化位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和 3个肉豆蔻酰化位点。　结论　Sjsp16基因编码蛋白为具有脂质识别和结合功能的分泌蛋白 ,可能为潜在的血吸虫病药物靶点或疫苗候选分子。

摘要：目的 亚克隆和表达日本血吸虫钙结合蛋白SjE16的编码基因,初步研究其免疫反应性。方法 根据表达序列标签(ESTs)测序的结果设计引物,从含有钙结合蛋白基因片段的克隆中扩增得到该编码基因,亚克隆人原核表达载体pGEX4T-1中表达,然后用ELISA方法初步检测重组蛋白的免疫反应性。结果 成功克隆和表达了日本血吸虫SjE16基因,该重组蛋白用于血吸虫病免抗体ELISA检测,其特异性和敏感性分别为94.1％(16/17)和88.2％(15/17)。非治疗组在感染后9～11wk抗体水平升高,并在感染后21wk仍维持高水平,而治疗组血清抗SjE16抗体水平在治疗后11wk下降至感染前水平。SjE16用于检测血吸虫病患者血清中的抗体,其特异性为98.3％(57/58),急性患者和慢性患者的敏感性分别为85.5％(53/62)和70.2％(40/57)。结论 获得了SjE16的重组蛋白,该蛋白能被日本血吸虫病患者的血清所识别,且在病兔药物治疗后迅速下降。SjE16重组蛋白具有诊断现感染和疗效考核的潜能。

摘要：目的研究跨膜蛋白35(T MEM35)基因在肝癌细胞生长、细胞周期中的作用,探讨跨膜蛋白TMEM35作为潜在肝癌治疗靶点的可行性。方法利用跨膜蛋白二级结构预测工具SPLIT对TMEM35蛋白的二级结构进行分析;利用实时定量多聚酶链反应技术检测TMEM35基因在肝癌患者癌组织及相应癌旁组织中的表达情况;采用化学合成干扰小RNA片段(siRNA)干扰TMEM35基因在肝癌细胞MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,通过软琼脂克隆形成实验观察肝癌细胞非贴壁依赖性克隆生长情况,流式细胞术分析细胞周期;通过蛋白功能相互作用网络数据库STRING推测TMEM35蛋白发挥相应功能的搭档基因。结果 TMEM35为具有4个跨膜结构域的四跨膜蛋白,实时定量多聚酶链反应检测发现TMEM35基因在肝癌中表达紊乱,其中与相应癌旁组织相比较,TMEM35在14例癌组织中表达显著上调,在20例癌组织中表达显著下调(P<0.05)。针对TMEM35基因设计合成siR NAs能够特异性沉默TMEM35基因在肝癌细胞株MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,并且肝癌细胞在软琼脂培养条件下,形成的克隆显著减少。流式细胞术分析发现干扰TMEM35基因表达,能够减缓细胞周期进展,表现为细胞G_1期增多,S期减少。结论 TMEM35基因编码具有四跨膜结构域的膜蛋白,在肝癌细胞生长中发挥重要作用。

摘要：目的　克隆和表达日本血吸虫免疫素 Sjp5 0的编码基因 ,初步研究其免疫反应性。方法　根据 EST测序的结果设计引物 ,从含有免疫素基因片段的克隆中扩增得到该编码基因 ,亚克隆入原核表达载体 p GEX4 T- 1中表达 ,然后用 EL ISA方法初步检测重组蛋白的免疫反应性。结果　成功克隆和表达了日本血吸虫 Sjp5 0基因。该重组蛋白用于血吸虫抗体的 EL ISA检测 ,在动物实验中检测特异性和敏感性分别为 94 .12 %和 76 .6 7% ,非治疗组兔体内的抗体在感染后 9- 11周上升到高水平 ,并在感染后 2 1周仍维持在高水平 ,而治疗组兔血清中抗 Sj Fp5 0抗体水平在治疗后 11周迅速下降至感染前抗体水平。用于血吸虫病人血清中的抗体检测的特异性为 98.30 % ,急性病人和慢性病人检测的敏感性分别为 95 .2 0 %和 6 3.2 0 %。结论　获得了 Sjp5 0的重组蛋白 ,该蛋白能被日本血吸虫病人的血清所识别 ,且在动物实验中其抗体水平在药物治疗后 11周降至感染前的水平 ,具有诊断现症感染病人和疗效考核的潜能。