摘要：[目的]构建携带DREAM基因小分子干扰RNA(siRNA)的腺相关病毒载体包装质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,为进一步研究DREAM基因在癌痛基因治疗中的作用奠定基础。[方法]设计并合成包含DREAM短发夹序列(shRNA)两条互补的寡核苷酸链,退火后插入到经过EcoRⅠ和SalⅠ双酶切的pDC316-EGFP-U6质粒的EcoRⅠ和SalⅠ位点,得到重组质粒pDC316-EGFP-DREAMshRNA-U6,然后以其为模板,通过PCR扩增DREAMshRNA-EGFP片段,并引入EcoRⅠ和SalⅠ位点,PCR产物与pSANV2.0经EcoRⅠ和SalⅠ酶切后连接得到重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,转化入感受态大肠杆菌DH-5α,获得阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定。[结果]PCR、酶切鉴定以及测序结果证实,插入的片段序列和位点完全正确,重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP的构建成功。[结论]成功构建携带DREAM基因小分子干扰RNA重组腺相关病毒包装质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP。

摘要：目的:针对DREAM基因中外显子序列,设计并筛选出起作用的siRNA,为进一步研究以DREAM为靶标的基因治疗提供依据。方法:通过利用生物信息学的方法设计出66条潜在的针对DREAM基因中外显子序列的siRNA序列。潜在的序列根据G+C含量分析及Genbank BLAST检测,我们筛选了三条较理想的DREAM基因siRNA靶标,并将其构建到pENTR/H1/TO载体中,转染细胞后提取总蛋白并用Western blot方法检测DREAM蛋白的表达水平。结果:示外显子9中5'末端位置为1253的序列能够抑制80%的DREAM的蛋白表达。结论:这一研究结果为进一步siRNA类药物的实验研究提供了理论基础。

摘要：设计一种便携式测试仪,在肝细胞培养的过程中对其功能进行快速的现场检测,并可配合上位机将数据处理、分析、统计等功能整合完成。选用光学比色法,将单色光源、集成光电传感器做为测量元件构建单片机控制系统,使用溴甲酚绿法和脲酶法,分别测量培养液中白蛋白和尿素的含量。实验中能够快速、准确的完成肝细胞功能的现场测试,白蛋白浓度测量范围10-100g/L±5%,尿素浓度测量范围1-15mmol/L±10%,拟和度均达99%以上。该仪器可作为判断生物人工肝治疗效果的重要依据,已在治疗现场得到了成功应用。

摘要：设计制作一套基于ATmega16单片机为核心的检测系统,集信号采集、传输、处理、显示于一体,实现对溶液中白蛋白与尿素浓度的定性测量;该系统以朗伯-比尔定律为理论基础,采用光电转换、串口复用、触摸屏等技术,完成设备的制作和实现设备面向现场操作;试验证明,通过将该系统的测量值与样本值进行对比,其误差在±2%以内,符合定性测量的要求;系统的便携、快速、稳定、可扩展、易操作、低成本等特性,满足了相关领域的应用要求。

摘要：阿姆河右岸地区普遍存在异常高压现象,对于钻井设计和施工构成重大影响。基于正常压实理论模型的地层压力预测方法,采用的是单一压实趋势线,对于复杂岩性地区的地层压力预测效果不佳。为此,针对不同岩性采用分段式地层压力预测方法,对盐上层、膏盐层和盐下碳酸盐岩层进行了压力预测,经钻井实测地层压力检验,相对误差在2%以下。该方法提高了阿姆河右岸地区复杂地质环境下地层压力预测的准确性,能有效指导钻井工程的设计和施工。

摘要：扩大桥梁刚性基础底面积的加固方法在桥梁加固工程中得到广泛应用,但基础边长尺寸关系和面积增加大小及等的分析与计算无成熟方法;文中将地基视为弹性材料,依据温克尔假定计算基础下的压应力,并将其控制在因长期受压而提高的地基承载力以内。本文方法可为实际工程中刚性基础加固设计提供借鉴。

摘要：目的：构建和鉴定靶向磷脂酰肌醇激酶-3（PI3K） 亚单位编码基因PI3Kcb （catalytic,beta polypeptide）基因的小干扰RNA真核表达载体.方法：根据siRNA设计原则,在PI3Kcb mRNA序列中选择1个特异性靶序列,体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其定向克隆入siRNA载体pDC316-EGFP-U6,重组后获得siRNA载体质粒pDC316-PI3Kcb siRNA-EGFP,采用PCR检测和DNA测序以保证siRNA的方向和序列正确.结果：得到阳性重组克隆pDC316-PI3Kcb siRNA,经过PCR鉴定和测序,结果正确.结论：成功构建靶向PI3Kcb基因的siRNA载体pDC316-PI3Kcb siRNA-EGFP,为PI3Kcb的基因沉默研究奠定了可靠的基础.

摘要：暖通空调设备是一个庞大而复杂的系统工程,大到跟大型的高层办公楼,星级酒店小的直接跟民用的建筑有着重要的关系,其施工技术关系到管道工程及图式设计等关键技术。作为专业的暖通技术人员,必须严格把握好每道施工环节,保证建筑物的暖通系统正常使用。从施工中经常出现的一些问题出发,提出了实际施工过程中应加强的几点解决措施。

摘要：全民健身事业发展是贯彻党中央战略决策的重要内容,更是中国建设新机遇的新定位,对于进一步优化顶层设计,提高人员综合素质具有重要意义。基于此,本文通过对当前全民健身热点及存在问题的介绍,重点阐述应对措施及发展趋势。

摘要：背景中国儿童细菌耐药监测组(ISPED)每年对纳入的12家成员单位的儿童耐药监测数据进行汇总和分析,了解儿童感染性病原学变化和耐药现状。目的分析2022年我国儿童细菌感染和耐药现状,旨在指导儿童抗菌药物合理应用。设计横断面调查。方法菌株来源于2022年1月1日至12月31日ISPED成员单位细菌室,抗菌药物敏感试验采用自动化细菌鉴定及药敏分析仪或扩散纸片法,肺炎链球菌青霉素药物敏感性试验采用E-test法,结果判断采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)2022年标准。主要结局指标儿童人群菌群分布特征及主要分离株对抗菌药物耐药性变化,多重耐药菌(MDROs)的检出情况。结果2022年ISPED单位共分离到50399株临床菌株,革兰阳性菌和阴性菌的比例分别为38.8%和61.2%。前10位分离株分别是:大肠埃希菌(14.3%)、流感嗜血杆菌(11.8%)、金黄色葡萄球菌(11.4%)、肺炎链球菌(11.3%)、卡他莫拉菌(7.3%)、凝固酶阴性葡萄球菌(6.8%)、肺炎克雷伯菌(5.3%)、铜绿假单胞菌(4.4%)、鲍曼不动杆菌(2.3%)及粪肠球菌(2.1%)。大肠埃希菌是新生儿、学龄期和青春期儿童主要分离菌,流感嗜血杆菌是婴儿主要分离菌,肺炎链球菌是幼儿和学龄前期儿童主要分离菌。青霉素不敏感菌株(PNSP)在脑脊液和非脑脊液来源肺炎链球菌中的比例分别为88.9%和6.6%。甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)、碳青霉烯类耐药的肠杆菌目细菌(CRE)、铜绿假单胞菌(CR-PA)和鲍曼不动杆菌(CR-AB)检出率分别为32.8%、4.5%、7.6%和24.3%。MRSA、CRE和CR-PA在新生儿组检出率分别为33.2%、6.4%和11.3%,高于非新生儿组的32.6%、4.2%和7.5%;CR-AB在新生儿组的检出率为10.9%,低于非新生儿组的26.3%。结论2022年MDROs检出率较往年呈现下降趋势,应高度警惕和防范MRSA、CRE和CR-PA在新生儿中的定植、感染与传播。