摘要：目的利用电穿孔仪对成年雄性SPFKM小鼠睾丸进行电穿孔实验,以观察电穿孔对成年雄性SPFKM小鼠睾丸的损伤,为体内精子介导基因转移提供依据。方法设置高压和低压两组不同的体内电穿孔参数,将SPFKM小鼠睾丸置于电穿孔仪上的钳型电极的两侧进行体内电穿孔,2周后处死动物,分离睾丸和附睾,将睾丸称重后用4%多聚甲醛固定,常规组织切片和HE染色,显微镜下观察;将附睾置于M16培养基中分离其中精子,稀释后置显微镜下观察。结果(1)高压电穿孔2周后,附睾精子活力检查和睾丸组织切片镜下观察显示:高压电穿孔可造成睾丸的不可逆损伤;其睾丸质量也显著低于对照组睾丸质量(P0.05)。结论合理地设计体内电穿孔参数,一方面不会对SPFKM雄鼠睾丸的生殖能力造成严重影响,另一方面它还可为外源基因导入到生殖细胞提供了一种可能。

摘要：目的原核表达瘦素受体（OBR）近跨膜区重组融合蛋白并进行SD大鼠免疫实验，观察其对SD大鼠脂肪沉积的影响。方法设计1对带有BamHI和Hindlll酶切位点特异性引物，扩增OBR胞外近跨膜区基因片段（1705～2364bp），经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamHI和HindⅢ两酶切位点之间，构建OBR胞外近跨膜区重组表达质粒并在大肠杆菌*** BL21（DE3）中表达，***电泳分析和western blotting鉴定表达产物。随后制备OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白并免疫SD大鼠，观察其对SD大鼠体质量、采食量、体长、Lee’S指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积、皮下脂肪沉积的影响。结果***电泳分析和Western blotting鉴定结果显示，在IPTG诱导下OBR胞外近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量27600左右的融合蛋白。对SD大鼠免疫0BR胞外近跨膜区重组融合蛋白后，体质量、体长、Lee’S指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积与对照组无明显差异，而采食量显著增加、皮下脂肪细胞体积减小。结论成功表达西藏小型猪瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白，免疫SD大鼠可促进采食和抑制皮下脂肪沉积。

摘要：背景:转基因小鼠的开发已成为类风湿关节炎动物模型的必然趋势,HLA-DR是通过何种分子机制导致类风湿关节炎的发病是目前研究热点。目的:拟对含有人CD4基因质粒pcDNA3-CD4和含HLA-DR0401基因质粒pLNCX2-DR*0401进行体外转化扩增,并观察其在小鼠成纤维细胞内的表达。设计、时间及地点:开放性实验,于2007-06/2008-01在南方医科大学中医药学院实验中心、南方医科大学动物实验中心分步完成。材料:含人CD4基因载体pcDNA3-CD4和含HLA-DR0401基因载体pLNCX2-DR*0401分别由美国宾西法尼亚大学微生物学系和马里兰巴尔的摩县大学生物化学系惠赠。大肠杆菌DH5α为北京天根生化科技有限公司产品。小鼠成纤维细胞(L929)细胞株为南京凯基生物科技发展有限公司产品。方法:取pcDNA3-CD4和pLNCX2-DR*0401质粒转化DH5α感受态菌,再接种到含氨苄青霉素的LB琼脂培养板进行抗性筛选培养,挑取阳性克隆菌落进行培养后抽提质粒,并取样进行限制性内切酶鉴定和测序。采用脂质体转染L929细胞,通过流式细胞仪和直接免疫荧光法对人CD4和HLA-DR0401的表达进行检测。主要观察指标:①质粒扩增情况。②质粒酶切及测序鉴定。③质粒转染L929细胞后的表达。结果:经转化扩增后,pcDNA3-CD4、pLNCX2-DR*0401质粒的纯度及浓度均较高。人CD4表达载体经酶切鉴定和测序证实目的基因插入正确且与GenBank一致,HLA-DR0401表达载体酶切鉴定正确,测序鉴定HLA-DRα基因正确。流式细胞仪检测转pcDNA3-CD4载体的细胞约61%呈阳性,直接免疫荧光结果显示人CD4在转基因细胞中得到表达,分布于胞膜及胞质内。流式细胞术检测仅有1%的转pLNCX2-DR*0401载体的细胞呈阳性,直接免疫荧光无特异性荧光检出。结论:成功转化并扩增了人CD4和HLA-DR0401表达载体,并转染小鼠成纤维细胞系L929,为下一步转基因鼠模型的构建奠定了实验基础。

摘要：目的采用CRISPR/Cas9系统敲除肝癌细胞系HepG2的高迁移率蛋白A2(HMGA2)基因,探讨HMGA2敲除对于肝癌细胞生长、增殖、迁移以及侵袭的影响。方法根据GenBank数据库搜索人HMGA2序列,利用在线sgRNA设计软件针对HMGA2的第一外显子以及第二外显子各设计一条sgRNA,构建靶向HMGA2的sgRNA重组敲除载体sgE1和sgE2,将sgRNA载体转染细胞,通过有限稀释法筛选得到HMGA2^-/-细胞株。通过CCK8实验以及平板克隆形成实验检测HMGA2敲除对于HepG2细胞生长以及克隆形成能力的影响;采用Transwell实验检测HMGA2敲除对于HepG2细胞迁移与侵袭的影响。结果相比于野生型,HMGA2^-/-细胞株的生长速率减慢,克隆形成能力(121.83±21.68 vs 59.50±20.68,P<0.01)、迁移(359.67±32.53 vs 245.61±24.23,P<0.05)与侵袭(251.33±43.43 vs 47.00±10.00,P<0.01)能力显著下降。结论HMGA2敲除降低了肝癌细胞HepG2的体外生存能力以及转移能力,HMGA2基因可以作为一个肝癌治疗的潜在靶点。

摘要：目的探索和建立西藏小型猪胚胎成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法。方法取35d的西藏小型猪胚胎分离胚胎成纤维细胞,进行体外原代培养及传代培养,观察细胞成纤维细胞的形态和生长状况。根据猪Y染色体上性别决定基因SRY设计引物进行性别鉴定,同时以β珠蛋白作为内参基因,建立PCR反应体系鉴别胚胎的性别。结果西藏小型猪胚胎成纤维体外分离后,呈贴壁生长,快速增殖。PCR性别鉴定结果表明雄性胚胎细胞可扩增出一特异性SRY基因条带,而雌性则没有。该法可快速鉴定胚胎的性别,可用于体细胞克隆动物早期性别鉴定。结论研究结果表明利用胶原酶消化法所获得的西藏小型猪胚胎成纤维细胞可在体外稳定培养并传代,利用PCR鉴定猪胎儿性别具有简单、快速、准确的特点,可应用于克隆猪研究中体细胞系的早期性别鉴定。

摘要：目的探索和建立西藏小型猪胚胎成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法。方法取35 d的西藏小型猪胚胎分离胚胎成纤维细胞,进行体外原代培养及传代培养,观察细胞成纤维细胞的形态和生长状况。根据猪Y染色体上性别决定基因SRY设计引物进行性别鉴定,同时以β珠蛋白作为内参基因,建立PCR反应体系鉴别胚胎的性别。结果西藏小型猪胚胎成纤维体外分离后,呈贴壁生长,快速增殖。PCR性别鉴定结果表明雄性胚胎细胞可扩增出一特异性SRY基因条带,而雌性则没有。该法可快速鉴定胚胎的性别,可用于体细胞克隆动物早期性别鉴定。结论研究结果表明利用胶原酶消化法所获得的西藏小型猪胚胎成纤维细胞可在体外稳定培养并传代,利用PCR鉴定猪胎儿性别具有简单、快速、准确的特点,可应用于克隆猪研究中体细胞系的早期性别鉴定。

摘要：根据实验动物环境及设施国家标准(GB14925-2010)规定,结合公司的土建基础,综合考虑动物实验的要求,工程设计合理,施工规范。设施的各项指标均符合国家的相关标准。目前该设施总体运行良好,以下就该设施建设过程中的一些体会进行归纳。

摘要：医科院校学生走上工作岗位后,主要从事生命科学的临床和科研工作,许多工作需要动物实验知识.所以在大学阶段掌握动物实验基本技能显得非常重要.实验动物学是一门理论和实践结合非常紧密的课程,从某种意义上讲,实验课的教学对医学生将来实验工作更具有指导意义.所以精心设计动物实验课的教学,培养学生的动物实验技能是摆在授课教员面前的一个课题.

摘要：目的:分析比较实验用藏猪和巴马小型猪线粒体DNA控制区D-loop区碱基序列的差异,探讨小型猪的遗传标记。方法:提取59头藏猪和16头巴马小型猪血液基因组DNA,设计特异引物扩增mtDNA D-loop,从凝胶中纯化后直接测序,进行比较。结果:2种小型猪mtDNA D-loop都存在串连重复序列区和非重复序列区(5′端和3′端);重复序列区处于中间位置,藏猪有2种类型(A型和B型),巴马小型猪只有1种类型(A型);藏猪D-loop5′端(704bp)发现有20个变异位点,其中有3个主要的转换位点:305,500,691,巴马小型猪未发现多态位点,与藏猪以及其他猪相比,巴马小型猪D-loop5′端在180、404位有2个碱基差异。结论:藏猪mtDNA D-loop区碱基序列存在2种类型(A型和B型);巴马小型猪mtDNA D-loop区碱基序列多态性较低,有2个遗传标记位点。

摘要：目的了解西藏小型猪的群体遗传结构。方法针对所优选出的40个微卫星位点设计引物,对35头南方医科大学饲养的西藏小型猪样本进行PCR扩增,扩增产物采用STR扫描技术进行测定,分析西藏小型猪的群体遗传结构。结果西藏小型猪群体平均有效等位基因数为4.6187,平均杂合度为0.7576,平均多态性信息含量0.7463。结论西藏小型猪群体具有丰富的遗传多样性,符合封闭群动物遗传特性。