摘要：目的评估5种现行国内与国际食品沙门氏菌标准中选择性增菌步骤的等效性。方法按照GB4789.28—2013的方法使用沙门氏菌参比菌株验证5种沙门氏菌选择性增菌液亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)、四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)、罗伯特增菌液(RV)、穆勒-考夫曼四硫酸盐新生霉素增菌液(MKTTn)、亚硒酸盐煌绿增菌液(SBG)和5种选择性琼脂平板沙门氏菌显色琼脂平板(CAS)、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸盐琼脂平板(XLD)、木糖赖氨酸十四烷基硫酸钠琼脂平板(XLT4)、亚硫酸铋琼脂平板(BS)和赫氏肠道菌琼脂平板(HE)的生长率(PR)和特征性生长;按照ISO 16140—2:2016和传统统计学方法设计路径,经高污染样品检测比较5种选择性增菌液和2种选择性琼脂平板的组合方法的敏感性、相对真值和可接受限值,评估10种增菌分离组合的分离敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果SC对猪霍乱和猪霍乱沙门氏菌孔成道夫变种存在无效增殖;CAS和XLD识别伤寒和非伤寒、硫化氢差异表达沙门氏菌能力明显优于XLT4、HE、BS;84件样品(畜肉22件、禽肉32件和水产品30件)经5种增菌组合确认25件阳性(29.76%)、鉴定分型42株沙门氏菌。5种组合方法的敏感性分别为:84.00%、100.00%、88.00%、88.00%和92.00%,没有统计学差异(P>0.05)。按照ISO 16140—2:2016释义组合1(SC+TTB)因SC存在漏检导致可接受限值超限;10种增菌组合中以RV-CAS综合效益最好,敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为:68.00%、95.00%、85.00%、88.00%。结论SC因窄谱增菌效果,影响方法敏感性、导致负偏差结果偏倚,使可接受限值超限值;增菌组合推优RV-CAS,平板组合推荐CAS+XLD;建议GB4789.4能完善沙门氏菌血清鉴定,加强应对流通样品混合菌型污染及接轨国际食品微生物标准。

摘要：目的制备用于检测肉制品中沙门菌实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的标准质粒。方法设计针对沙门菌inv A基因的引物,扩增特异片段,转入质粒载体中构建重组质粒。将构建的重组质粒作为标准品,进行优化后的实时荧光定量PCR,建立标准曲线,并考察该标准品灵敏性及稳定性。结果成功构建含有沙门菌inv A基因的质粒标准品,用其建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板的拷贝数呈良好线性关系(r2=0.9979),最低可以检出10拷贝/反应。该标准质粒经验证具有良好的稳定性。用该质粒标准品检测肉制品中的沙门菌,经2 h增菌后,可在7 h内完成对样品的检测。结论所构建的质粒标准品可用于荧光定量PCR检测肉制品中的沙门菌,为考量实验质量提供参考依据。

摘要：目的:建立并评价检测副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的添加内标(internal control,IC)的PCR方法。方法:利用生物信息学方法,分析副溶血性弧菌中特异基因toxR和tlh,设计引物,toxR中900 bp的特异序列为目的片段;tlh中522bp的特异序列为添加片段,利用复合引物法构建IC,建立PCR检测体系。结果:本研究成功构建添加IC的PCR检测体系,利用该体系对副溶血性弧菌和非副溶血性弧菌进行检查,结果显示,以副溶血性弧菌为模板的PCR反应可扩增到900 bp和560 bp的特异片段,而以非副溶血性弧菌为模板的反应扩增到一条560 bp的IC片段。该方法对DNA灵敏度的检测极限是0.5 pg/μl,此时IC的最佳添加浓度是0.5 fg/μl。并对多份水产品的检测结果也证实其能起到很好的指示假阴性作用。结论:添加内标的PCR方法能够准确检测水产品中副溶血性弧菌,排除假阴性干扰。

摘要：【目的】了解上海地区生牛乳中金黄色葡萄球菌污染状况,产肠毒素特性及细菌耐药性。【方法】采集上海地区4家奶牛场共计306份生牛乳,按照GB4789.10《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定及毒素测定,并对检出的金黄色葡萄球菌根据临床与实验室标准化协会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法进行药敏试验,定量测定最低抑菌药物浓度(MIC)。【结果】共检出金黄色葡萄球菌32株,检出率为10.5%;其中17株产肠毒素阳性,阳性率为53.1%;对上述金黄色葡萄球菌株进行12种抗生素的耐药检测,其中耐药最严重的是青霉素、氨苄西林、红霉素、四环素,耐药率分别达78.1%、65.6%、53.1%、21.9%,并表现出多种耐药谱。【结论】上海地区生牛乳中金黄色葡萄球菌污染及其肠毒素产毒能力较强,耐药情况严重,这与奶牛养殖过程中抗生素暴露有关,建议上海地区奶牛场扩大对奶牛乳腺炎治疗的药物筛选范围,根据药物敏感实验结果合理选择抗菌药物。