摘要：背景:血管紧张素转换酶是肾素-血管紧张素-醛固酮系统的重要组成部分,血管紧张素转换酶基因第16内含子内存在一个287bp的Alu序列的插入/缺失(I/D)多态性,与心血管疾病、IgA肾病等疾病的发生具有一定的相关性。目的:分析汉族人群血管紧张素转换酶基因插入/缺失(I/D)多态性的分布,并与已知的其他种族人群进行比较。设计:以健康汉族人为观察对象的观察性实验。单位:江苏省临床免疫学重点实验室,苏州大学附属第一医院检验科,江苏大学医学技术学院检验系。对象:受检者为2005-12/2006-01苏州大学附属第一医院门诊健康体检者241名,男152名,女89名,平均年龄(27±8)岁,均为无血缘关系的苏州地区汉族人,经临床及实验室检查确认排除肝、肾、内分泌、心脑血管疾病。方法:应用聚合酶链反应检测了241名汉族健康体检者血管紧张素转换酶基因I/D多态性等位基因的基因型,并采用荧光标记末端终止法对基因型为D/D、I/I的PCR纯化产物进行DNA测序确认。主要观察指标:血管紧张素转换酶基因I/D基因型,等位基因频率以及与其他种族人群的比较。结果:241名受检者全部进入结果分析。①血管紧张素转换酶的基因型表现为缺失纯合子(DD)、插入纯合子(II)以及缺失和插入杂合子(DI),等位基因D较等位基因Ⅰ缺失一段287bp的核苷酸,即Alu序列。②II,ID,DD基因型频率分别为46.1%,41.5%,12.4%;等位基因I,D频率分别为66.8%,33.2%。③日本人与汉族人群血管紧张素转换酶基因型分布相似,均以II型最常见,DD型最少;欧美人群以ID居多,II型较少。汉族人群与日本人及欧美人群血管紧张素转换酶基因型频率的分布具有种族差异性。与其他各民族人群比较,汉族人群等位基因I显著高于上述各民族(χ2=105.55,P<0.01),等位基因D明显较低(χ2=87.54,P<0.01)。结论:血管紧张素转换酶基因多态性具有种族差异性。了解不同种族人群间血管紧张素转换酶基因多态性的遗传特点,是研究血管紧张素转换酶基因I/D多态性与疾病相关性的基础和前提。

摘要：背景:研究表明叉头转录因子1是一种新的2型糖尿病易感基因,但2型糖尿病患者与健康人的叉头转录因子1基因在转录水平上差异性的研究不多。由于还没有商品化叉头转录因子1的质粒标准品,因此有必要构建其标准品。目的:构建应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测叉头转录因子1mRNA的质粒标准品。设计、时间及地点:单一样本重复实验,于2007-11/2008-03在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成。材料:SYBRExScriptTM反转录-聚合酶链反应Kit试剂盒,SYBRPremixExTaqTM试剂盒,凝胶回收纯化DNA试剂盒,质粒DNA小量纯化试剂盒,PMD18-TVector试剂盒等。方法:从健康志愿者血标本中提取总RNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板应用聚合酶链反应扩增出目的片段,对其回收纯化连接到PMD18-T载体及转化JM109,阳性克隆经测序分析,确认重组质粒正确。抽提重组质粒,用紫外分光光度仪测定其浓度,再根据公式换算成拷贝浓度,最后稀释成梯度标准品。主要观察指标:重组质粒聚合酶链反应和基因测序结果,标准品标准曲线的相关系数及标准品的重复性。结果:成功构建了叉头转录因子1质粒标准品,通过聚合酶链反应及基因测序鉴定其目的片段已成功插入载体。各稀释度的标准品经荧光定量-聚合酶链反应扩增后,其循环阈值与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性范围是2.39×(105～1012)copies/mL。各稀释度标准品的批内重复性好,其变异系数范围为0.29%～1.16%。结论:实验成功构建了具有较好灵敏度和重复性的叉头转录因子1质粒标准品。

摘要：本指南是参考美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)有关临床实验室信息管理系统选择标准指南,结合我国的实际情况提出的。本指南定出了临床实验室信息管理系统基本功能的指导性要求以及设计时需遵循的概括性条款,旨在建立效率高、基本功能完善的临床实验室信息管理系统。[第一段]

摘要：背景:目前,对CD40/D40L的研究主要集中在可溶性和蛋白方面,对其在转录水平上的研究文献不多,可能与其无商品化质粒标准品有关。目的:构建检测CD40/CD40L mRNA表达水平差异的标准品。设计、时间及地点:单一样本实验,于2009-04在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成。材料:取手术切除的子宫肌瘤组织,经患者知情同意。方法:以手术切除的子宫肌瘤组织细胞的总RNA为模板、Random6mers为引物反转录合成cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人CD40/CD40L基因相应的cDNA片断,构建PMD-18-CD40/CD40L重组质粒,鉴定测序后,用荧光定量PCR制作标准曲线。主要观察指标:①RNA质量检测结果。②扩增的目的片段电泳结果。③CD40/CD40L基因测序结果。④标准品的扩增情况。结果:组织提取的总RNA完整性良好,构建的CD40/CD40L质粒经PCR扩增后分别得到136bp,200bp的清晰条带,测序结果与目的片段完全一致,且质粒的原始浓度为2.66×1013、2.45×1013copies/mL,倍比稀释至2.0×106copies/mL均能得到良好的标准曲线(R2=1)。结论:实验成功构建了CD40/CD40L基因荧光定量PCR标准质粒。

摘要：【摘要】目的探讨肺癌患者血清／外周血单个核细胞（PBMC）mieroRNA（miltNAs）表达谱的变化及其意义。方法本研究属于临床病例对照研究。建立基于实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测miRNA的方法，对其进行定量研究；2011年11月至2012年9月收集苏州大学附属第一医院住院及门诊肺癌患者61例，肺部良性疾病及健康对照各48例，各组间性别、年龄匹配，年龄为64（40-85）岁；采用RT-qPCR技术检测血清及配对PBMC中miR．20a、miR-21、mitl-25、mitl-29a、miR-31、miR-126、miR-129、miR-145、miR-205的表达水平，以U6为内参，用F=2^△Ct法计算。其中△Ct=CtmiRNA-CtU6。F表示目标miRNA表达量相对于同一样本u6的变化倍数。采用SPSS19．0软件进行统计分析，两组样本的比较采用成组设计的两样本t检验，多组数据的比较采用单因素方差分析，若差异有统计学意义，多组数据两两间的比较采用S-N-K检验，两变量之间关系采用Pearson相关性分析，对各样本中u6的ct值是否相等作Brown-Forsythe检验。结果肺癌患者血清miR．20a（F=271．64，P〈0．01）、mill-21（F=2232．51，P〈0．01）、miR-205（F=45．13，P〈0．01）、miR-29a（F=19．98，P〈0．01）、miR-25（F=313．19，P〈0．01）、miR-126（F=32．38，P〈0．叭）与健康对照组、肺部良性疾病组之间差异有统计学意义，且其中miR-29a（健康对照组3．27±2．44，肺部良性疾病组3．19±0．32，肺癌组0．99±2．31）、miR-25（健康对照组3．88±0．62，肺部良性疾病组3．42±0．51，肺癌组1．79±0．37）、miR-126（健康对照组3．19±1．77，肺部良性疾病组2．67±1．55，肺癌组0．96±0．84）在肺部疾病恶性化发展中呈下调趋势；肺癌miR-31（比值=1．85，P〈0．01）与健康对照相比升高，miR．145（比值=-3．00，P〈0．05）则下降；不同分化程度的肺癌患者血清mill-31（F=5．22，P〈0．01）表达差异有统计学意义，中分化时期（1．40±0．39）表达最高；当全身转移（特别是骨转移）时，miR-31（无转移1．16±0．40，有转移1．03±0．24，P〈0．05）表达下降。在与肺癌患者血清配对PBMC中，mill-126（F=690．58，P〈0．01）、miR-129（F=26．66，P〈0．01）、miR-145（F=48．57，P〈0．01）、miR-205（F=308．61，P〈0．01）、mill-25（F=218．57，P〈0．01）、miR-31（F=48．05，P〈0．01）与健康对照组、肺部良性疾病组之间差异有统计学意义，且其中miR-25（健康对照组6．54±0．63，肺部良性疾病组5．82±0．51，肺癌组3．97±0．55）、mill-31（健康对照组4．26±0．43，肺部良性疾病组4．08±0．37，肺癌组3．43±0．38）在肺部疾病恶性化发展中呈下调趋势；肺癌miR-20a（比值=1．39，P〈0．01）、miR．29a（比值=1．42，P〈0．01）与健康对照相比均升高；当全身转移时，miR-21（无转移5．11±0．24，有转移5．28±0．24，P〈0．05）表达上升；患者miR-31血清和PBMC中的表达水平呈负相关（r=-0．369，P〈0．05）；血清miR-29a（S=0．968，P〈0．01）、miR-25（S=0．906，P〈0．01）、miR-126（S=0．969，P〈0．01）的t／OC曲线下面积有统计学意义。结论miRNA可能参与了肺癌转移的多个步骤，包括局部浸润、渗出血管或在远处的初步生存和转移灶生长等，也可能影响肺癌的预后。mittNA的检测可为肺癌的进展机制提供一个新的研究线索。

摘要：背景：最近发现缺血修饰白蛋白诊断心肌缺血的敏感性很高,能在心肌缺血早期可逆阶段被检出,是第一个被FDA批准销售的心肌缺血标志物。目的：探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病患者经皮冠状动脉球囊置入后冠状动脉粥样硬化性心脏病患者缺血修饰白蛋白的水平变化及其临床意义。设计、时间及地点：病例-对照观察,试验于2007-11/2008-03在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成。对象：选择苏州大学附属第一医院心内科住院确诊为冠状动脉粥样硬化性心脏病并行择期经皮冠状动脉球囊置入治疗的患者46例,男35例,女11例,年龄34～81岁;另选苏州大学附属第一医院体检健康人群60名作为对照,男36名,女24名,年龄42～75岁。方法：测定60名体检健康者和46例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者术前与术后5min,术后2,6h血清中缺血修饰白蛋白的水平;46例择期经皮冠状动脉球囊置入治疗的患者,于球囊扩张后5min,2,6h取静脉血2mL进行心肌肌钙蛋白T测定,测定值〉0.16μg/L者判为阳性。主要观察指标：血清中缺血修饰白蛋白及心肌肌钙蛋白T的水平。结果：行经皮冠状动脉球囊置入治疗后5min、术后2h缺血修饰白蛋白水平较术前及对照组升高（P〈0.01）;术前与术后6h相比,差异无显著性意义（P〉0.05）。在行经皮冠状动脉球囊置入治疗后5min、术后2h46例患者心肌肌钙蛋白T均为阴性,术后6h有3例患者心肌肌钙蛋白T阳性。结论：心肌缺血患者血清中缺血修饰白蛋白水平升高较心肌肌钙蛋白T出现早,缺血修饰白蛋白可作为心肌缺血发生后到发生细胞坏死之前的一个早期指标。

摘要：目的研究褪色沙雷菌的耐药率与分子流行病学规律,建立多位点序列分析方法,明确其进化特征,为临床针对性使用抗菌药物和防控此致病菌感染提供依据。方法对2013年9月-2014年12月分离的40株褪色沙雷菌进行体外药物敏感性试验与多位点序列分析（MLSA）,并用Splits tree与CLUSTALW软件进行生物信息学分析,揭示其流行趋势。结果体外药敏试验结果表明,40株褪色沙雷菌对13种抗菌药物的耐药率在10.0%~52.5%,对亚胺培南耐药率为32.5%;MLSA设计4个管家基因,GC含量约为60.0%;各等位基因数分布于14~16,各多态性位点数分布于33~74,gyrB的多态性位点数最多（74个）;Splits tree软件分裂分解分析结果显示,大部分褪色沙雷菌聚在一起,形成一个克隆复合体;CLUSTALW软件聚类分析结果显示,40株褪色沙雷菌形成19个ST型,其中ST8型12株,且ST8型是耐碳青霉烯类抗菌药物褪色沙雷菌的流行与暴发型,ST8、ST9、ST10与ST11形成一个克隆复合体CC8。结论褪色沙雷菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药率较高,且多为泛耐药菌株;褪色沙雷菌的分子流行病学趋势相对较慢,在基因组上高度保守,目前需要重点监测以ST8型为代表褪色沙雷菌CC8克隆复合体的流行,以防其在医院的大规模流行与暴发。