摘要：目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。

摘要：1 引言聚合酶链反应(PCR)已在生物学领域导致了一场革命,其中包括诊断方法,通过便利途径扩增DNA 以便实验室分析,但是,标准双引物 PCR 必需要知核酸序列以设计引物,因此,仅限用于已知核苷酸序列的基因或重复部分。Welsh 等(1990)和Williams 等(1990)各自独立报道了不需要预知靶序列的新 PCR (现称为随机扩增多肽性 DNA,

摘要：课程思政教学案例是重要的教学资源。《动物寄生虫病学》是动物医学专业的核心课程,深度挖掘蕴含在课程中的育人元素,精心设计课程思政教学案例,有机融入课程教学全过程,是实现课程思政的重要途径,对于培养合格的兽医师具有重要意义。笔者以棘球蚴病为例,从教学目标、学情分析、思政教学设计、教学组织实施和教学效果等方面进行探讨,以期为《动物寄生虫病学》课程思政建设提供参考。

摘要：为评价Serpin基因重组表达产物对预防鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,***)感染的效果,克隆和表达*** Serpin基因,对表达产物进行初步纯化和复性,制备免疫原。设计了重组蛋白肌肉注射组、重组蛋白口服组、重组蛋白滴鼻组3个试验组以及红、白对照组。分别于7、14和28日龄对雏鸡进行3次免疫,35日龄时用3×104个***孢子化卵囊攻虫,第7天末宰杀,对各组的存活率、相对增重率、卵囊减少率、ACI等指标进行统计分析。结果表明,各免疫组的平均增重与红对照组相比均有显著增加(P<0.05),其中以重组蛋白肌肉注射组增重最多,相对增重率为66.73%,优于其他免疫组;各免疫组卵囊产量较红对照组均有显著的下降,其中重组蛋白肌肉注射组卵囊减少率最高,为30.01%;各免疫组ACI均明显高于红对照组,其中以重组蛋白口服组最高,但仍低于160,暗示Serpin蛋白并不是一个理想的球虫疫苗保护性抗原。

摘要：根据GenBank发表的Eimeria tenella serpin(Etserpin)基因设计1对引物,从孢子化卵囊总RNA中用RT-PCR方法扩增Etserpin基因,克隆后测序,应用生物信息学分析预测其核苷酸及其编码蛋白的结构与功能。结果表明,Etserpin开放阅读框为1 248bp,编码一分泌蛋白,N端具有1个28aa的信号肽,有1个跨膜区域,有2个糖基化位点和21个磷酸化位点,88,89,98～101,208～212,283～287,302～304区段是其可能的B细胞表位;同源性比对与进化树的分析表明其为抑制性serpin蛋白,结构保守,与***、***和***亲缘关系较近。二级结构以!螺旋和随机卷曲为主,具有类似于serpin家族蛋白的三级结构。

摘要：目的:建立猴源溶组织内阿米巴原虫巢式PCR检测方法并初步应用于临床检测;方法:根据溶组织内阿米巴原虫16S r DNA基因序列,设计1对阿米巴属原虫保守引物和1对溶组织内阿米巴原虫特异性引物,建立猴源溶组织内阿米巴原虫巢式PCR检测方法,摸索出了该检测方法的最佳反应条件,进了行特异性和敏感性试验,并对96份猕猴粪便样品进行检测;结果:该巢式PCR方法能特异性地扩增出猴源溶组织内阿米巴原虫目的片段,与莫氏内阿米巴、波氏内阿米巴、迪斯帕内阿米巴、大肠内阿米巴、微小隐孢子虫等11种相关原虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到0.3 fg的阳性参照DNA;对临床样品检测结果表明该PCR技术检查阳性者显微镜检查均为阳性;结论:建立的巢式PCR方法具有高度的特异性和敏感性,对于溶组织内阿米巴原虫病的诊断和流行病学调查具有重要的应用价值。

摘要：旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(***)HMGB1基因质粒DNA免疫对同源株攻虫的免疫保护效果。将EtHMGB1基因插入pcDNA3.1(-)/myc-His A真核表达载体中,并在Hela细胞中进行体外瞬时表达。设计了pcDNA3.1(-)/myc-EtHMGB1免疫组、pcDNA3.1(-)/myc-His A免疫组、重组蛋白质+FCA佐剂免疫组、pcDNA3.1(-)/myc-EtHMGB1+重组蛋白质联合免疫组、FCA佐剂免疫组、未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组7个试验组。分别于14和21日龄对鸡进行两次免疫,28日龄时除未免疫未攻虫组外各组用1×104个***孢子化卵囊攻虫,以平均增重、卵囊产量和病变记分作为免疫保护效果的评价指标。结果显示,成功构建了pcDNA3.1(-)/myc-EtHMGB1重组质粒,转染后该质粒可在Hela细胞中进行瞬时表达。该重组质粒单独免疫、重组蛋白质单独免疫或重组质粒与重组蛋白质联合免疫均对鸡肠道病变改善效果不明显,但可显著提高增重,降低卵囊产量,尤以重组质粒与重组蛋白质联合免疫效果最佳,显示Prime-boost免疫策略可提高该重组质粒的免疫保护效果。上述结果显示HMGB1可作为未来球虫疫苗研制的良好候选抗原之一。

摘要：动物寄生虫病学是动物医学专业的一门主干课程。为加深学生对动物寄生虫病相关知识的理解,培养其临床思维,提高学习兴趣和积极性,锻炼综合能力,在动物寄生虫教学活动中通过案例设计、案例布置、案例实施、教师点评等措施打造出适合动物寄生虫病学案例教学方式。结果表明:该教学方法能够培养学生独立分析和解决问题的能力,提高掌握知识点的深度,调动课堂积极性,激发学生的学习兴趣,增加团队协作能力,学生反映良好,是一种适合动物寄生虫病学课程的教学方法,可为地方应用型高校动物医学相关专业教学提供参考。

摘要：高迁移率族蛋白是细胞"警报素"的一员,具有多样的生物学效应。本研究利用生物信息学技术从柔嫩艾美耳球虫转录组中鉴定到Et HMGB1基因序列,根据获得的基因序列设计引物,以柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊总RNA为模板,通过RT-PCR技术获得Et HMGB1基因,并构建p ET28a-Et HMGB1重组表达载体,进行原核表达。结果显示,Et HMGB1基因全长为432 bp,编码1段全长为143个氨基酸的多肽,该融合蛋白分子质量约为16 000,与预期分子质量一致。Et HMGB1基因的成功克隆和表达为该蛋白的功能研究奠定了基础。

摘要：目的:建立能同时检测粪便中溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴和莫氏内阿米巴原虫的巢式多重PCR方法;方法:根据溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴和莫氏内阿米巴原虫16S rDNA基因序列,设计1对阿米巴属原虫保守引物和3对不同内阿米巴原虫特异性引物,通过反应体系优化及特异性、敏感性等建立了巢式多重PCR方法,并对部分临床样本进行了检测;结果:该巢式多重PCR方法能特异性扩增溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴和莫氏内阿米巴原虫目的片段,特异条带大小分别为439、174、553bp,区分明显;该方法可检测粪便样品中阿米巴原虫滋养体的最小值约为20个,在固定其它两种内阿米巴原虫滋养体细胞数量的情况下,该方法最低能分别检测到0.01个***、1个***和0.1个***滋养体。临床样本的检测也显示巢式多重PCR方法与单一PCR具有较高的一致性。结论:巢式多重PCR方法具有高度的特异性和敏感性,其在溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴和莫氏内阿米巴原虫的诊断和流行病学调查中具有重要的应用价值。