摘要：目的针对编码大肠杆菌志贺毒素由位于STEC染色体上的前噬菌体携带的stx基因和O_(157)抗原编码基因rfbe设计特异性引物,并对反应体系和反应条件进行优化,建立一种针对肠出血性大肠杆菌及其毒素的环介导等温扩增(LAMP)反应技术检测法。方法通过优化LAMP反应的各影响因素,确定LAMP反应体系和反应条件并利用已优化的LAMP体系进行相关检测。结果确定LAMP反应体系为:内引物(FIP、BIP)与外引物(F3、B3)的比例为8:1,Mg^(2+)浓度10 mmol/L,dNTPs浓度1. 2 mmol/L,甜菜碱浓度0. 4 mol/L,Bst DNA聚合酶的添加量为1μl。LAMP反应时间为60 min,反应温度为60。以PCR法作为对照,LAMP检测的敏感度为5×10~1 CFU/mL,PCR的敏感度为5×10~4 CFU/mL。同时,研究应用所建立的LAMP快速检测法对部分革兰阳性和阴性菌及102株O_(157)大肠杆菌进行快速检测。结果显示,检测特异度达100%,O_(157)大肠杆菌rfbe检出率为100%(102/102),stx1检出率为95. 2%(59/62),stx2检出率为92. 9%(52/56)。结论成功建立了一种可应用于肠出血性大肠杆菌及其毒素的敏感、特异的LAMP检测方法。