摘要：【目的】从棉花黄萎病真菌Verticillium dahliae中克隆木聚糖酶基因,并在毕赤酵母中进行异源表达,研究酶学性质。【方法】通过多序列比对设计简并引物,扩增出真菌***木聚糖酶基因片段,再采用基因组步行PCR技术获得全长木聚糖酶基因序列。经BLAST比对并结合GT-AG原则分析,该基因含有一个大小为63bp的内含子,利用DpnI介导的缺失方法对含内含子的全长木聚糖酶基因进行剪接,获得该基因的全长cDNA。将克隆到的cDNA在毕赤酵母GS115进行了表达,重组酶经纯化后进行酶学性质分析。【结果】BLAST比对显示,该cDNA推测的氨基酸序列和已知木聚糖酶的最高一致性为72%。测得该酶最适反应温度为45℃,最适反应pH值为6,在pH5-9维持50%以上的活性,对山毛榉材木聚糖具有最好的水解效果。Mg2+和Ca2+对酶有激活作用,分别提高了33.7%和16.6%,EDTA,β-巯基乙醇和NaN3对酶的活性基本没有影响,Tween-80和DMSO使酶活性提高了28.4%和12.8%。【结论】本文从引起棉花黄萎病的真菌***中克隆到的木聚糖酶基因是在GenBank上登录的第一个来自棉花黄萎病真菌的木聚糖酶基因序列。本文所用的克隆方法可以高效的从植物病原真菌和白腐真菌克隆只含一个内含子的11家族的新木聚糖酶基因,避免了摸索原始菌株酶表达诱导条件,检测酶的活性等繁琐的操作。酶学性质分析显示该酶在低聚木糖的制备,面包改良上有潜在的应用价值。

摘要：根据GenBank中α-乙酰乳酸脱羧酶的基因序列(slaA)设计引物,以粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)HU1基因组DNA为模板通过PCR扩增得到了目标基因,全长为780 bp。将该基因分别连接到大肠杆菌表达载体pET30a和毕赤酵母表达载体pPICZαA上,构建表达质粒pET30a-slaA和pPICZα-A-slaA,并在对应的宿主中进行了表达。结果表明,大肠杆菌和毕赤酵母的表达产物的最适温度和pH均分别为40℃和7,两者在不同pH下的稳定性也相似,只不过毕赤酵母的表达产物的热稳定性要略强于大肠杆菌的表达产物。

摘要：为了得到巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)发酵的最佳培养基,在单因子试验的基础上,应用Plackett-Burman设计法对影响芽孢产量的基本培养基组分中的关键因子进行了筛选,并进一步采用响应面分析法(RSM)对影响芽孢产量的关键因素最佳水平作了深入的研究。结果表明,影响巨大芽孢杆菌芽孢产量的关键因素是豆粕和淀粉的浓度。通过RSM的拟合和推算得到在豆粕和淀粉浓度分别为48.85和19.67 g/L时,此时模型预测发酵最佳产量为43.16×108CFU/mL,验证值为42.2×108CFU/mL,预测值与验证值之间吻合较好,比原始培养基提高了约10倍。

摘要：为了得到棘孢木霉(Trichoderma asperellum)发酵的最佳培养基,应用Plackett-Burman设计法对影响棘孢木霉菌丝体产量的关键因子进行了筛选,并进一步采用响应面分析法对影响菌丝产量的关键因素最佳水平进行了研究。结果表明,影响棘孢木霉菌丝体产量的关键因素为硝酸铵和硫酸镁的浓度。通过响应面分析法的拟合和推算,得到在硝酸铵和硫酸镁浓度分别为1.7 g/L和1.43 g/L时,模型预测发酵最佳产量为0.85 g/mL,验证值为0.905 g/mL,预测值与验证值之间吻合较好,约是原始培养基产量的2倍。

摘要：为了得到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵的最佳培养基,应用Plackett-Burman设计法对影响枯草芽孢杆菌芽孢形成的关键因子进行筛选,并进一步采用响应面分析法对影响芽孢产量的关键因素进行研究。结果表明,影响枯草芽孢杆菌芽孢产量的关键因素为玉米淀粉和豆粕的浓度。通过响应面分析法的拟合和推算,得到玉米淀粉和豆粕浓度分别为2.48、4.90 g/mL时,此时模型预测发酵最佳产量为105亿/mL,验证值为110亿/mL,预测值与验证值之间吻合较好,比优化前实际产量(80亿/mL)提高了37%。

摘要：为了对贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CY30的发酵培养基进行优化以提高芽孢产量,应用Plackett-Burman设计法对影响贝莱斯芽孢杆菌CY30芽孢形成的关键因子进行筛选,通过最陡爬坡路径法确定主要影响因素的响应中心点,并进一步采用中心组合设计和响应面分析法确定最优培养基。结果表明,该菌株芽孢产量的关键影响因素为甘薯粉和酵母膏的浓度。通过响应面分析法的拟合和推算得到,甘薯粉和酵母膏浓度分别为37.35 g/L和15.29 g/L时,模型预测发酵最佳产量为91.2亿CFU/mL,验证值为97.5亿CFU/mL,预测值与验证值之间吻合较好,比优化前实际产量(63.8亿CFU/mL)提高了53%。

摘要：为了得到里氏木霉(Trichoder mareesei)发酵的最佳培养基,应用Plackett-Burman设计法对影响里氏菌丝体产量的关键因子进行了筛选,并进一步采用响应面分析法对影响菌丝产量的关键因素最佳水平进行了研究。结果表明,影响里氏木霉菌丝体产量的关键因素为鱼蛋白胨和甘油的浓度。通过响应面分析法的拟合和推算,得到在鱼蛋白胨和甘油浓度分别为1.414 3和2.439 3 g/100 m L时模型预测发酵最佳产量为85 g/100 m L,验证值为81 g/100 m L,预测值与验证值吻合较好,约是原始培养基产量(60g/100 m L)的1.35倍。

摘要：采用响应面分析法对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)NBIN-863的发酵培养基进行优化,应用Plackett-Burman设计法对影响NBIN-863发酵的关键因子进行筛选,通过最陡爬坡路径法确定主要影响因素的响应中心点,并进一步采用中心组合设计和响应面分析法确定最优培养基。将发酵液稀释后进行线虫毒性研究,结果表明,影响该菌株芽孢产量的关键因素为淀粉和豆粕的浓度。通过响应面分析法的拟合和推算,得到淀粉和豆粕浓度分别为35.2 g/L和34.7 g/L,测得NBIN-863发酵液的晶体含量为5.4 mg/mL,稀释后对线虫的致死率为81.0%,与预测值(81.2%)十分接近,比优化前NBIN-863的实际致死率(45.0%)提高了80%。