摘要：乡土建筑是重要的文化遗产类型,是人们的家园遗产。蒙自缘狮洞石窟寺及其古建筑群是中国传统退台式建筑的颠峰之作,其对称严谨的"靈"字形道教建筑,巧妙地利用借景手法,亦有"滇南第一洞天"的美誉。从文化遗产传承视角审视认为,应关注乡土建筑文化生境,树立乡土建筑保护整体观,挖掘乡土建筑象征文化内涵,传承匠人设计建设乡土建筑的技巧。

摘要：目的设计PCR联合限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）快速检测HBV阿德福韦耐药变异（rtN236T）的方法以及观察阿德福韦耐药毒株的动态变化情况。方法7例乙型肝炎患者在阿德福韦单药治疗过程中出现病毒突破或应答不完全。对其系列血清标本的HBVDNA逆转录酶部分区域进行直接或克隆后测序，设计和应用PCR—RFLP方法对rt236位点的变异情况进行检测。采用Hamming距离法计算HBV部分逆转录酶区域的基因多样性。结果l例患者出现rtA18IV变异，3例为rtN236T变异。建立了基于限制性内切酶DraI或HpaI的PCR—RFLP方法检测rtN236T变异：可以检测至少10％的弱势毒株，特异性为100％。在病毒突破前8个月可以检测到耐药毒株；该耐药毒株后来成为优势毒株。1例患者停用阿德福韦3个月后野生毒株取代耐药毒株重新成为优势株。1例患者在病毒突破后继续服用阿德福韦，rtN236T突变被一个新的突变株（rtN236V）替代。拉米夫定耐药患者的HBV逆转录酶有更明显的基因多样性。结论建立了PCR—RFLP快速检测rtN236T变异的方法；阿德福韦耐药毒株可以表现为不同的转化过程。

摘要：目的探讨我国HBV感染者中人类白细胞抗原（HLA）-A＊0201限制性特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位HBcAg（17-27）V／I变异体的病毒学背景特点。方法应用生物信息学方法分析GenBank中30条不同HBV基因型的病毒株HBcAg（18-27）区段的序列特点。设计错配引物，构建针对HBVB、C基因型HBcAg／18-27）V／I的PCR-限制性片段长度多态性分析（RFLP）筛选方法。以PCR—RFLP和测序方法检测来自我国8省区160份HBV基因型B、C标本的HBcAg（18-27）V／I基因特点。用表位预测网站分析不同HBcAg（18-27）特异性CTL表位基因变异体与HLA-A＊0201分子结合力的差异。结果成功构建了针对HBV基因B、C型HBcAg（18-27）V／I的PCR—RFLP筛选方法；在调查的HBVB、C基因型血清中发现HBcAg（18-27）V的阳性率仅为1．88％（3／160）；生物信息学分析显示HBcAg（18～27）I与HLA—A＊0201分子的结合力明显低于HBcAg（18-27）V（HLA Ligand评分123与156，SYFPEITHI评分22与24）。结论我国流行的主要HBV流行株中HBcAg（18～27）的最后一位氨基酸主要表现为异亮氨酸，而非缬氨酸；在进行细胞免疫学研究时，以HBcAg（18-27）V作为参照需要充分考虑这一病毒学背景。

摘要：目的建立实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型B^D方法并验证其准确性。方法比较GenBank中已发表的明确分型的143株HBV全序列,设计特异的组合引物探针,应用实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法对兰州地区128例慢性乙型肝炎患者血清标本进行基因型B、C、D检测,并随机对检测的基因型各3株标本进行S基因测序验证。结果128例标本中B型检出率为20.3%(26/128),C型71.9%(92/128),D型7.8%(10/128);18株HBV克隆标本S基因测序结果与本分型法完全一致。结论实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法能够简便、灵敏、快速、准确地鉴定HBV基因型,适宜用于HBV基因型的大规模临床和流行病学调查。

摘要：目的 研究靶向乙型肝炎病毒（HBV）C基因的shRNA（shRNA）诱导RNAi（RNAi）在BHK-21细胞中抑制HBV的复制与表达及抗病毒效果.方法 根据成都军区昆明总医院传染病中心克隆测序的中国56个民族CHB患者HBV基因组（基因型B属ayw1亚型）已在GenBank登录注册：CYN/2002和CYN/2000（GenBank登录号AY517488,AY517489,等）,为了监测siRNA功能提供报告基因系统,将HBV C基因PCR产物克隆构建成报告基因表达载体pC-EGFP-N1和载体pCDNA3.1B（-）,设计并构建两个靶向同源（CYN/2002和CYN/2000）毒株HBV C基因的长24核苷酸（nt）的shRNA表达质粒（S1和S2）,随机设计的用于对照的非同源长24 nt的shRNA表达质粒S3,将其克隆到载体pU6上,构建成表达目的 shRNA重组表达载体,并与pC-EGFP-N1共转染BHK-21细胞.首先在BHK-21细胞中使用BH-2型荧光显微镜观察和FACS-440型流式细胞仪检测绿色荧光蛋白（EGFP）表达细胞数量,评估该shRNA表达质粒在转染后不同时间对C基因/EGFP融合报告基因表达的抑制作用,接着在BHK-21细胞中通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）进一步检验了shRNA抗病毒效果.结果 通过BH-2型荧光显微镜观察和FACS-440型流式细胞仪检测,发现在shRNA表达质粒和pC-EGFP-N1共转染BHK-21细胞24 h后,与pC-EGFP-N1或pEGFP-N1单质粒转染相比,S1或S2的共转染组、S1＋S2的共转染组使EGFP的表达水平降低了90%,而对照质粒S3或pU6共转染组无显著降低EGFP的表达水平,差异有统计学意义（P＜0.01） 应用RT-PCR检测C基因mRNA和EGFP基因mRNA的表达量,结果与BH-2型荧光显微镜和FACS-440型流式细胞仪检测结果相吻合,差异有统计学意义（P＜0.01）.进一步证实了RNAi抗病毒效果,抗病毒效应持续时间超过48 h.结果 发现,创建的靶向C基因的shRNA能够有效特异地抗C-EGFP基因在BHK-21细胞中的复制与表达.结论 靶向C基因的RNAi技术能够有效特异地抗HBV在BHK-21细胞中的复制与表达.RNAi可能成为抗重大传染病HBV/HCV安全有效的应急疫苗.

摘要：探讨消毒灭菌设备维护管理工作中必须注重的重要环节和关键环节。采用医学工程学、卫生事业管理学和医院感染管理学相关理论和方法,详细分析开展消毒灭菌设备日常维护管理工作的必要性、重要性和根本目的。通过对医院已有和近期新购消毒灭菌设备使用情况的定期或不定期检查,同时也根据对其他单位相关设备管理情况的综合分析,总结出在消毒灭菌设备维护管理工作中必须注重的4个关键环节,对开展消毒灭菌设备日常维护管理工作具有重要的意义。

摘要：目的比较HBV基因B,C基因型患者间HBV特异性T淋巴细胞应答的差异。方法以我国主要流行的B,C基因型为病毒学背景,设计覆盖HBV全基因序列的重叠多肽池,PCR-RFLP方法检测患者HBV基因型,通过酶联免疫斑点试验检测30例基因B,C型慢性HBV感染者的特异性T淋巴细胞分泌IFN-γ差异。结果在30例慢性HBV感染者中基因B型有21例(70%),基因C型有9例(30%);在特异性T淋巴细胞应答方面,HBV基因B型患者明显高于基因C型患者(P=0.021)。结论HBV基因B型较高的特异性T淋巴细胞反应水平对于解释HBV基因B型患者与基因C型患者临床转归差异提供了细胞免疫学依据。

摘要：目的 :研究消毒灭菌设备管理过程中必须处理好的4个重要关系,以保证设备的高效运转。方法 :应用医院感染学和卫生事业管理学的相关原理和方法进行探索、实践。结果:必须正确处理医疗器械管理委员会与医学工程科、疾病预防控制科的关系,前期的设备调研、招标、采购、安装、验收与后期的设备使用、维护的关系,整体计划和局部需求的关系以及使用和维护的关系。结论:正确处理好上述4个关系,不仅为军地患者的医院感染管理工作提供了适合、合理而有效的技术物质装备,还充分实现了消毒灭菌设备的高效管理、物尽其用。