摘要：本研究根据华支睾吸虫cox 1基因序列设计合成特异性引物和探针,建立基于TaqMan MGB探针的人粪便中华支睾吸虫虫卵实时荧光PCR检测方法,同时评价该方法的特异性、敏感性、重复性。采用建立的荧光PCR方法对临床样本进行检测,并与改良加藤厚涂片法检测结果进行比对。结果显示,本研究建立的方法与形态和种属关系相近的寄生虫无交叉反应;以9.97×10^(7)~9.97×10^(0)copies/μL浓度的质粒作为标准品建立标准曲线,检测灵敏度为9.97 copies/μL;组内、组间重复性试验变异系数均小于0.4%。采用该方法检测280份居民粪便样本,检出阳性54份,经对比该方法敏感性高于改良加藤厚涂片法。本研究所建立的方法可用于华支睾吸虫虫卵的检测及诊断。

摘要：以新孢子虫Nc-5基因为目的基因,建立检测新孢子虫的PCR方法并初步应用。根据Gen Bank发布的新孢子虫Nc-5特异性基因序列设计引物,以新孢子虫基因组DNA为模板,利用梯度PCR法优化反应条件,建立PCR检测方法。以弓形虫、疟原虫、牛环形泰勒虫、包拉米虫和马尔太虫为模板进行扩增以验证建立方法的特异性。采用紫外分光光度计测定新孢子虫基因组DNA浓度和纯度,倍比稀释后的DNA进行PCR扩增,产物电泳分析确定建立方法的敏感性;选择高浓度和低浓度的新孢子虫基因组DNA重复检测3次,分析建立方法的重复性和稳定性。利用该方法对实验室建立的小鼠感染模型进行初步应用,评价建立方法的检测效果。结果成功建立新孢子虫的核酸扩增检测方法,扩增序列与Gen Bank(LN714476.1)中Nc-5基因序列一致性为100%,建立的新孢子虫核酸扩增检测方法与弓形虫、疟原虫、牛环形泰勒虫、包拉米虫和马尔太虫均无交叉反应,最低能检测新孢子虫DNA浓度为0.5788 pg/μL,应用该方法检测感染新孢子虫的BALB/c小鼠模型,可在肺和脑组织中检测到新孢子虫的感染。结果表明,建立的新孢子虫核酸扩增检测方法有效,并为后续研究奠定基础。

摘要：目的对口岸出境人员的旅行医学知识需求进行量化分析。方法按随机抽样,选择2016年5月-2017年3月间自河南口岸出境人员536名。基于德尔菲法设计《国际旅行医学知识问卷》对选取样本现场问卷调查;采用Epi Data3.1录入数据,以spss22.0分析。结果 1、基本情况:男性405名(75.6%),女性131名(24.4%),男女比:3.1:1。2、年龄构成:≤29岁年龄组,336名(62.7%);30-49岁年龄组,186名(34.7%);≥50年龄组,14名(2.6%)。3、文化程度:高中及以下248人(46.3%);大专及本科256人(47.8%);硕士及以上学历32人(6.0%)。4、出境目的 :劳务输出279人,占52.1%;其次,留学或学术活动202人,占37.7%;其他目的(商务、探亲、访友和旅游)居第三位,55人,占10.3%。5、出境目的地:亚洲第一位(26.3%)、非洲第二位(24.4%)、美洲第三位(19.6%)、欧洲第四位(18.1%),其他地区(11.6%)。6、预计境外旅行时间:1年以上者349人(65.1%);3-12个月者140人(26.1%);3个月以内者47人(8.8%)。问卷调查:1、68.5%出境者对于国外旅行罹患疾病或受意外伤害风险认知较高;2、62.1%的人担心身体检查不合格被目的国拒绝入境;3、84.5%的人渴望从国际旅行卫生保健中心了解国外防病知识;4、70.1%的人表示懂得旅行医学卫生;5、60.6%出境者表示会随身携带个人防病药剂或医疗器械,而74.6%的人表示需要当地国际旅行卫生保健机构提供专业防病药剂或医疗器械服务;6、52.2%出境者知晓"出国预防接种"能预防疾病;7、71.1%的人对于国际旅行可能罹患疾病有心理认知;8、79.7%应答者愿意在归国之际再来保健中心做健康复查。单因素和多因素分析显示:文化程度为旅行医学知识需求的独立影响因素,大专及本科学历者对旅行医学知识需求度是高中及以下应答者的2.179倍(95%CI:1.334-3.557)(P<0.05)。结论文化程度较低的旅行群体是普及旅行医学知识的重点人群。

摘要：目的建立一种快速、特异、灵敏的人粪便中华支睾吸虫虫卵检测方法,并对方法进行评价,为快速、准确、有效诊断人是否患有华支睾吸虫病提供依据。方法以华支睾吸虫细胞色素c氧化酶亚基1基因为靶位点,用Primer Express3.0软件设计引物,经Blast软件对相似序列搜索后,筛选出一套最优与常见寄生虫无交叉反应的引物;分别用猫后睾吸虫、粪类圆线虫、日本血吸虫、细粒棘球虫、卫氏并殖吸虫等可感染人类、虫卵形态易混淆、种属关系较近的寄生虫的DNA进行特异性实验;将含有目的片段的阳性质粒梯度稀释后进行PCR扩增,确定检测方法的灵敏性;利用建立的方法对吉林省白城市周边人粪样品进行检测,验证方法的可行性。结果利用细胞色素c氧化酶亚基1基因设计的引物仅对华支睾吸虫(或虫卵)DNA有扩增条带,而其他对照以及阴性对照均未有明显扩增条带,对华支睾吸虫虫卵阳性质粒DNA检测敏感性可达到2.47×10^(2)copies/μl,建立的方法能够对实际粪便中的华支睾吸虫虫卵进行有效扩增,与传统图片镜检法比较二者检测结果一致。结论PCR方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测人粪便中的华支睾吸虫虫卵,可以为华支睾吸虫病的快速诊断提供技术支持。