摘要：目的利用实时PCR技术,建立检测副溶血弧菌及其毒力株的方法。方法根据副溶血弧菌的跨膜转录激活蛋白toxR基因序列设计引物和改良分子信标(ROX标记),建立检测所有副溶血弧菌菌株的方法。通过与文献报道的检测直接耐热溶血素(TDH)基因的实时PCR体系合并,建立了同时检测副溶血弧菌及其毒力株的双重实时PCR方法。结果通过对9个属的101株菌株进行试验,所有的52株副溶血弧菌均产生ROX阳性信号(toxR^+),其余菌株均检测为阴性,其中46.2% (24/52)的副溶血弧菌产生HEX阳性信号(tdh^+)。检测toxR基因的实时PCR体系DNA灵敏度为10～100fg/PCR体系,菌液灵敏度为59.2～592 CFU/ml或2.96～29.6 CFU/PCR体系。另外成功构建了双重实时PCR体系,能同时对副溶血弧菌的toxR和tdh基因进行检测。结论建立的双重实时PCR体系能同时检测副溶血弧菌及其毒力株,从而为食品的安全检疫提供有效手段。

摘要：目的建立检测*** O157:H7环介导的等温扩增方法(LAMP)。方法选取*** O157:H7的rfbE基因设计LAMP引物,优化建立LAMP检测体系。并用该体系和国标法对76份人工污染样品进行了检测。结果所建立的*** O157:H7 LAMP体系具有良好的特异性,用该体系对9属13种41株菌进行检测,结果只有*** O157:H7的扩增产物电泳结果为阶梯状条带,非*** O157:H7均未产生扩增产物,灵敏性为2.7×101CFU/mL。样品及培养基对反应体系没有影响或影响很小。对76份样品进行了检测,*** O157:H7 LAMP检测方法与国标法的总符合率为96.1%,2h内即可完成检测。结论本研究建立的*** O157:H7的LAMP法不但解决了分子生物学检测对实验室仪器设备的高要求问题,而且检测方法简便、快捷,非常便于基层实验室和现场检测使用。

摘要：目的:利用多重PCR技术,建立可以同时检测多种食源性致病菌的多重PCR方法。方法:分别选择沙门氏菌invA基因,志贺氏菌的ipaH基因,单核细胞增生李斯特氏菌的hlyA基因,大肠杆菌O157:H7的eaeA基因,副溶血弧菌的toxR基因,设计多重PCR引物,建立多重PCR检测体系,并对该体系进行特异性和灵敏度实验。结果:通过对19株菌株进行实验,所有的目标菌株均为阳性,而其余菌株为阴性。对多重PCR体系的灵敏度进行考察,沙门菌的灵敏度为5000 CFU/mL;志贺氏菌的灵敏度为5500CFU/mL;单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度为5200 CFU/mL;O157:H7的灵敏度为5000CFU/mL;副溶血弧菌的灵敏度为6300CFU/mL。结论:建立的多重PCR体系能实现多种致病菌同时检测。