摘要：目的制备标准分子量DNA片段混合物。方法选取pMD18-T载体部分序列作为插入片段,设计引物,制备包含不同大小的标准分子量片段的克隆。大量培养细菌提取质粒,用双酶切、连接荧光接头的方法制备不同大小的带有荧光的标准分子量片段,混合,纯化,最终获得标准分子量片段混合物(内标)。结果用分子克隆方法制备出具有实用性的标准分子量片段混合物,其单个标准分子量片段大小分别为80bp、124bp、194bp、224bp、254bp、304bp、349bp、399bp、424bp、454bp。并且这些标准分子量片段混合物可以准确地对DNATyper15试剂盒的扩增产物进行检测。结论应用该方法制备了能满足研究和实验室要求的标准分子量片段混合物,为DNA分子量标准物标准品的制作提供了一种新的方法。

摘要：目的构建一套猪的STR复合扩增体系,并进行体系验证。方法筛选出猪的12个STR基因座:SW240、S0386、S0655、PigSTR4C、PigSTR5C、PigSTR7B、PigSTR11B、387A12F、PigSTR13E、PigSTR14A、PigSTR15A、PigSTR17A,并结合性别位点Amelogenin基因座设计荧光标记引物,优化反应条件,构建出复合扩增体系。结果成功构建了一套包含猪的12个STR基因座和1个性别位点的复合扩增体系。体系的最佳条件为10μL体积,60℃退火温度,28次循环。体系的准确性、一致性、均衡性、稳定性、种属特异性、多态性均良好,灵敏度达0.125ng。12个基因座的累积个体识别率为0.999999999999961,累积随机匹配概率为3.9208×10^-14,累积非父排除率为0.9952。结论本文构建的猪复合扩增体系可以用于涉及猪的个体识别和亲子鉴定的案件鉴定。

摘要：目的选取5种常见体液的10条特异性miRNAs基因,通过逆转录-终点法PCR技术构建复合扩增体系,并对体系的灵敏度进行测试,之后使用该体系检测静脉血、精液、月经血、唾液和阴道分泌液中miRNAs的表达情况。方法首先设计10条miRNAs标记的逆转录引物和cDNA扩增引物,构建10个标准miRNAs标记的荧光复合体系,并进行灵敏度测试。然后使用miRNeasy Mini Kit(QIAGEN)提取体液样本的RNA,运用荧光复合体系进行检测,并对检测结果进行分析。结果本研究得到10个标准miRNAs标记的分型结果,标准miRNAs标记的荧光复合体系的检测灵敏度为总miRNAs模板量≥1ng。静脉血样本10条miRNA检测结果:miR-451、miR-144-3p、miR-144-5p,峰值在3000~7000 rfu之间;月经血样本分型结果:miR-214、miR-451、miR-144-3p、miR-205-5p、miR-203-3p,峰值在800~7000 rfu之间;阴道分泌物样本分型结果:miR-144-3p、miR-203-3p,miR-205-5p,峰值在600~3000 rfu之间。唾液样本分型结果:miR-451、miR-144-3p、miR-205-5p、miR-203-3p,峰值在600~7000 rfu之间;精液样本分型结果:miR-888、miR-144-3p、miR-891a,峰值在1000~7000 rfu之间。结论本研究建立的该体系能够对5种法医学常见体液(静脉血、唾液、精液、月经血和阴道分泌物)进行区分鉴定,为犯罪现场体液斑痕鉴定提供了新的检测方法。

摘要：目的建立一种可以同时鉴定猪、牛、羊、鸡、鸭、猫、狗、鼠和鲤鱼的多重PCR检测方法,并测试其技术性能指标,评估其在法医学或食品安全事件中的应用价值。方法根据上述9种动物的线粒体细胞色素b基因,利用其片段中种间特异性强的序列设计引物,采用毛细管电泳检测平台对各种属PCR扩增产物进行检测,依据扩增片段长度的差异与标记的荧光对初始模板的肉源种属进行鉴别;并通过扩增特异性、实际样本测试、混合样本检测灵敏度等指标评价该方法在实际法医学或食品安全案件中的应用价值。结果经过验证,建立的同时鉴定9种肉源种属的复合检测体系对其中任意一个种属的检测特异性均较高,且灵敏度较强,能够满足绝大多数法医学或食品安全案件中的检测要求。结论本研究建立的肉源种属复合检测体系可以在法医学未知种属样本的鉴定及食品安全肉类掺假等案件中提供帮助。